鐵超載通過提高ROS水平激活MAPK通路誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、目的：
　　 骨質(zhì)疏松癥是指單位體積骨量減少伴有骨強(qiáng)度降低的疾病。骨質(zhì)疏松所導(dǎo)致的骨折等并發(fā)癥可導(dǎo)致殘疾、死亡，治療耗資大，給患者、家庭和社會(huì)帶來沉重的負(fù)擔(dān)。鐵是人體不可缺少的營養(yǎng)元素，鐵超載是導(dǎo)致骨質(zhì)疏松的重要因素之一。骨質(zhì)疏松主要與骨形成和骨吸收的動(dòng)態(tài)平衡破壞相關(guān)。其中成骨細(xì)胞的數(shù)量和活性決定了骨形成水平，從而影響骨量。凋亡作為細(xì)胞生理、病理的最終階段，成骨細(xì)胞的凋亡在骨質(zhì)疏松當(dāng)中起到了重要的作用。本實(shí)驗(yàn)通過檢測細(xì)胞內(nèi)ROS

2、水平及MAPK通路相關(guān)蛋白，探討鐵超載時(shí)成骨細(xì)胞凋亡的機(jī)制。
　　 方法：
　　 常規(guī)培養(yǎng)和傳代人成骨細(xì)胞系hFOB1.19細(xì)胞，取對數(shù)生長期的細(xì)胞，加入不同濃度的枸櫞酸鐵銨(FAC)，MTT法檢測細(xì)胞增殖。實(shí)驗(yàn)分為三組:對照組:細(xì)胞正常培養(yǎng)不加處理因素;FAC組:培養(yǎng)基中分別加入終濃度為100μM，300μM，500μM的FAC;抗氧化劑組:培養(yǎng)基中加入終濃度5mM的NAC和上述濃度的FAC。培養(yǎng)24小時(shí)后，Annex

3、in V-FITC/PI流式檢測成骨細(xì)胞凋亡，流式細(xì)胞技術(shù)檢測各組ROS水平，提取細(xì)胞總蛋白，Westernblot檢測MAPK通路中p-ERK，p-JNK，p-p38的表達(dá)水平，免疫熒光觀察細(xì)胞凋亡。采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。數(shù)據(jù)采用(χ)±s表示，多組間差異顯著性選用單因素方差分析多組間比較，組間比較選用SNK方法，P＜0.05表明具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 不同濃度的枸櫞酸鐵銨處理成骨

4、細(xì)胞后，細(xì)胞增殖活性明顯降低，早期凋亡和總死亡率顯著增加;不同濃度的枸櫞酸鐵銨處理成骨細(xì)胞后，其ROS水平分別增高至(35.73±2.52)％，(62.89±4.24)％和(76.06±3.55)％，MAPK通路中p-JNK和p-p-38的表達(dá)明顯增加并呈劑量效應(yīng)關(guān)系，而p-ERK1/2的表達(dá)減少，抗氧化劑NAC可以在降低ROS水平及MAPK通路相關(guān)蛋白表達(dá)的同時(shí)抑制枸櫞酸鐵銨所致的細(xì)胞凋亡。
　　 結(jié)論：
　　 鐵超載