糖皮質激素誘導成骨細胞凋亡的機制探討.pdf

1、目的:糖皮質激素(GC)誘導成骨細胞凋亡是糖皮質激素誘導的骨質疏松(GIOP)的主要細胞學基礎。最近的研究發(fā)現(xiàn),金屬蛋白酶組織抑制因子-1(TIMP-1)可抗鼠骨髓間質細胞系MBA-1(前成骨細胞)的凋亡。所以,我們測試了地塞米松(Dex)對小鼠胚胎成骨細胞系MC3T3-E1細胞中TIMP-1的影響,探討GC誘導成骨細胞凋亡的機制。
　　方法:小鼠胚胎成骨細胞系MC3T3-E1細胞放入適當?shù)呐囵B(yǎng)基及環(huán)境中培養(yǎng),以10-6~10-9

2、mol/L Dex(Dex干預組)、10-6mol/LDex+10-5mol/L糖皮質激素受體拮抗劑RU486(GR拮抗劑組)、200~1000ng/ml TIMP-1+10-6mol/L Dex(TIMP-1干預組)干預。對Dex干預組及GR拮抗劑組應用實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應(RTQ-PCR)檢測TIMP-1 mRNA的表達;用蛋白質免疫印跡法(Westernblot)和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)分別檢測細胞和培養(yǎng)基中的TI

3、MP-1蛋白水平。應用細胞凋亡ELISA試劑盒和酶底物法分別檢測Dex干預組及TIMP-1干預組的胞質核小體及半胱天冬酶-3(Caspase-3)的活化水平。
　　結果:1.RTQ-PCR結果表明,Dex降低了MC3T3-E1細胞TIMP-1 mRNA的表達水平,并呈劑量依賴效應。2.蛋白質免疫印跡法檢測結果顯示,Dex抑制MC3T3-E1細胞TIMP-1蛋白的表達,并呈劑量和時間依賴效應。3.TIMP-1 ELISA檢測結果顯示

4、,Dex抑制MC3T3-E1細胞TIMP-1的分泌,并呈劑量和時間依賴效應。4.利用GR拮抗劑米非司酮(RU486)探討Dex是否通過GR途徑介導TIMP-1的作用,結果發(fā)現(xiàn)10-5M RU486可拮抗Dex對TIMP-1的抑制作用。5.Dex誘導MC3T3-E1細胞凋亡,并呈劑量依賴效應。6.重組TIMP-1可減少Dex(10-6mol/L)誘導的MC3T3-E1細胞凋亡,呈劑量依賴效應。
　　結論:GC如Dex抑制成骨細胞TI