Erlotinib通過(guò)ROS介導(dǎo)JNK通路誘導(dǎo)NSCLC細(xì)胞凋亡的機(jī)制及臨床研究.pdf

1、分類號(hào)：R563密級(jí)：公開(kāi)UDC：610學(xué)校代碼：11065博士專業(yè)學(xué)位論文Erlotinib通過(guò)ROS介導(dǎo)JNK通路誘導(dǎo)NSCLC細(xì)胞凋亡的機(jī)制及臨床研究山鳳蓮指導(dǎo)教師程兆忠（教授）學(xué)科專業(yè)名稱內(nèi)科學(xué)（呼吸系病）論文提交日期2017年3月23日論文答辯日期2017年5月26日答辯委員會(huì)主席董亮（教授）Ⅱ制腫瘤細(xì)胞增殖，為肺腺癌治療藥物的作用機(jī)制及耐藥研究提供理論基礎(chǔ)。第二部分實(shí)驗(yàn)探討調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞(regulatyTcellTreg

2、)各亞群和調(diào)節(jié)性B淋巴細(xì)胞（regulatyBcellBreg)在EGFR陽(yáng)性肺腺癌患者外周血中的表達(dá)水平及口服厄洛替尼藥物的影響。方法：方法：第一部分實(shí)驗(yàn)研究中，研究了ERL對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的抗癌作用及其潛在的機(jī)制。MTT法檢測(cè)ERL對(duì)A549的細(xì)胞活性的抑制作用。應(yīng)用Hoechst33342染色和FACS測(cè)定法檢測(cè)ERL誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡作用；使用DCFHDA熒光標(biāo)記檢測(cè)A549細(xì)胞內(nèi)活性氧（reactiveoxygenspe

3、cies，ROS）的含量，JC1染色測(cè)量線粒體膜電位（MMP）。通過(guò)蛋白質(zhì)印跡法(WesternBlot)測(cè)定ERL對(duì)JNK蛋白的磷酸化狀態(tài)和下游凋亡相關(guān)蛋白的的表達(dá)影響。第二部分實(shí)驗(yàn)研究中采集19例晚期肺腺癌患者和20例健康人的外周血樣，通過(guò)流式細(xì)胞儀分析其外周血中Treg和Breg的比例，分別以CD4CD25標(biāo)記Treg、以CD45RA、CD4、CD25來(lái)標(biāo)記Treg亞群（rTregnonTregaTreg）、以CD19CD24hi

4、CD27標(biāo)記Breg。結(jié)果：結(jié)果：1體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)ERL可以顯著抑制A549的細(xì)胞生長(zhǎng)，且呈現(xiàn)濃度依賴性。Hoechst33342染色證實(shí)ERL誘導(dǎo)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡，與藥物濃度相關(guān)。將肺癌A549細(xì)胞與不同濃度的ERL（0，5，10，15，20，25，30，35，40，45μmolL）孵育24小時(shí)。MTT檢測(cè)顯示在體外不同濃度ERL對(duì)肺癌A549細(xì)胞的增殖產(chǎn)生不同程度的抑制作用，越高濃度的ERL對(duì)細(xì)胞增殖的作用越明顯，說(shuō)明ERL的抑

5、制作用有濃度依賴性。我們的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示ERL對(duì)A549細(xì)胞的24h小時(shí)半數(shù)抑制濃度（IC50）為23.09μgml。Hoehcst染色結(jié)果顯示，25μmolL組的染色細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞核的碎裂、大小不等的圓形小體，表現(xiàn)出調(diào)亡的狀態(tài)。當(dāng)濃度為45μmolL時(shí)，細(xì)胞內(nèi)調(diào)亡小體的形成，細(xì)胞破碎，呈高強(qiáng)度藍(lán)色熒光?？梢?jiàn)當(dāng)加入不同濃度的ERL（0，5，10，15，20，25，30，35，40，45μmolL）時(shí)，凋亡細(xì)胞的數(shù)量明顯增加，并呈劑量濃度