DATS通過ROS活化MLK3-JNK誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡.pdf

1、目的：探討DATS誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制，并探討活性氧在JNK活化過程中的作用。
　　方法：用濃度為50、100、150μM的DATS處理HL-60細(xì)胞0、0.5、1、3、6、12h，或用抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine，NAC）預(yù)孵育HL-60細(xì)胞30min后，再用濃度為100μM的DATS處理HL-60細(xì)胞0、0.5、1、3、6、12h，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的ROS水平；蛋白印跡法檢測(cè)

2、MLK3、JNK的磷酸化水平；Hoechst染色觀察細(xì)胞的凋亡形態(tài)變化和DNA Ladder檢測(cè)細(xì)胞凋亡；用MLK特異性阻滯劑CEP-1347預(yù)處理后，觀察100μM DATS處理細(xì)胞3h后蛋白p-JNK的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：不同濃度DATS處理HL-60細(xì)胞不同時(shí)間后，細(xì)胞流式檢測(cè)顯示ROS的產(chǎn)生與DATS處理呈時(shí)間劑量依賴關(guān)系，在0.5-3h隨著DATS處理時(shí)間和濃度的升高而升高，ROS的熒光強(qiáng)度在3h、150μM時(shí)達(dá)到最高

3、峰(為89.7±3.67)，其后維持在一個(gè)較高水平。
　　DATS處理HL-60細(xì)胞3h，開始出現(xiàn)細(xì)胞凋亡與DNA斷裂，6-24h時(shí)，細(xì)胞出現(xiàn)明顯的核固縮，核崩解，明顯的DNA梯度等凋亡表現(xiàn)，用ROS阻斷劑NAC預(yù)處理后，Hoechst染色和DNA Ladder分析均未出現(xiàn)凋亡的表現(xiàn)。
　　DATS能誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞 MLK3磷酸化水平顯著升高，NAC能顯著下調(diào)HL-60細(xì)胞MLK3的磷酸化水平，MLK特異性阻滯劑CEP-