VPA促進冬凌草甲素誘導HL-60細胞凋亡的作用及機制研究.pdf

1、背景：
　　冬凌草甲素（oridonin，ORI）是從傳統(tǒng)中藥冬凌草中提取出來的四環(huán)二萜類天然有機化合物，是冬凌草中發(fā)揮作用的主要成分，具有抗炎、抗病毒和免疫調節(jié)等多種生物學功能，近年來，研究表明冬凌草甲素能抑制乳腺癌、宮頸癌、肝癌等多種腫瘤細胞的生長，也能抑制急性白血病的惡化，是一種理想的治療急性白血病的藥物。組蛋白去乙?；敢种苿℉DACi）能抑制組蛋白脫乙酰酶，增加組蛋白過乙?；瘜е氯旧w重組、細胞周期停滯、誘導細胞分化和

2、凋亡等一系列生物學作用。研究表明，VPA作為一種組蛋白去乙?；敢种苿?，單獨或者與其他藥物聯(lián)合作用可以通過誘導細胞凋亡發(fā)揮抗白血病的作用。
　　為了增強中藥ORI療效同時降低化療藥物 VPA副作用，本研究將小劑量ORI和VPA進行聯(lián)合用藥，觀察他們對急性早幼粒白血病細胞 HL-60細胞增殖和凋亡的影響并探討其作用機制，為臨床治療急性早幼粒白血病提供新方案打下實驗基礎。
　　目的：
　　探討VPA與冬凌草甲素（orido

3、nin，ORI）聯(lián)合誘導HL-60細胞凋亡的作用及其機制。
　　方法：
　　CCK-8法選取ORI和VPA最佳協(xié)同作用劑量；VPA和ORI單獨或聯(lián)合作用于HL-60細胞后光學顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學變化以及 Hoechst33342染色后熒光顯微鏡下觀察細胞核形態(tài)學變化；AnnexinV/PI試劑盒檢測HL-60細胞凋亡率；RT-PCR檢測Bax/Bcl-2等凋亡相關基因mRNA水平改變；并通過RT-PCR篩選參與外源性信號通

4、路的死亡受體配體對；Western blot檢測凋亡相關基因caspase-8、caspase-9的蛋白表達和caspase-3剪切片段的表達；預先加入或不加入caspase抑制劑處理HL-60細胞，采用Annexin V/PI流式試劑盒檢測兩藥聯(lián)合后細胞凋亡的變化；Western blot檢測 ERK、Pi-ERK，P38、Pi-P38，JNK、Pi-JNK的蛋白表達；分別加入MAPK抑制劑后流式細胞術檢測細胞凋亡率，并通過WB檢測c

5、aspase-3的蛋白表達；建立APL動物模型驗證ORI+VPA能否誘導白血病細胞凋亡。
　　結果：
　　冬凌草甲素與VPA聯(lián)合治療抑制HL-60細胞增殖；VPA增強冬凌草甲素誘導HL-60細胞凋亡；光學顯微鏡下和Hoechst33342染色后熒光顯微鏡下觀察：ORI+VPA組比單獨用藥組細胞凋亡率多；冬凌草甲素和 VPA聯(lián)合作用激活 caspase-3、caspase-8和caspase-9；內源性凋亡途徑中Bax蛋白表達

6、增高，而Bcl-2蛋白表達降低；外源性凋亡途徑中死亡受體配體對Fas/fasl表達增高；MAPK信號通路中ERK和P38發(fā)生磷酸化，而JNK未發(fā)生磷酸化；APL動物模型中ORI+VPA組實體瘤體積最小，TUNEL結果顯示ORI和VPA能誘導白血病細胞凋亡。
　　結論：
　　VPA確實能促進 ORI誘導 HL-60細胞凋亡，兩者具有協(xié)同作用；VPA+ORI誘導HL-60細胞凋亡具有 caspase依賴性；凋亡通過內源性和外源性