紫草素誘導(dǎo)白血病HL-60細(xì)胞凋亡及其機制研究.pdf

1、目的:本實驗旨在研究從中藥紫草科植物紫草中提取分離出來的有效成分萘醌類化合物紫草素在體外對人早幼粒白血病細(xì)胞HL-60細(xì)胞增殖的抑制、誘導(dǎo)凋亡的作用。
　　方法:
　　1.將不同濃度的紫草素0、1、2、4、8mg/ml加入到早幼粒白血病細(xì)胞HL-60細(xì)胞培養(yǎng)體系，MTT比色法檢測紫草素對HL-60細(xì)胞增殖的影響。
　　2.用Annexin V/PI雙標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)檢測加入不同濃度紫草素及不同時間段的早幼粒白血病細(xì)胞HL

2、-60細(xì)胞凋亡率。
　　3.用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測BCL-2基因水平，分析白血病HL-60細(xì)胞凋亡作用與Bcl-2蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.MTT測定顯示紫草素體外中、高濃度（1～8ug/ml）作用于人白血病HL-60細(xì)胞48h、72h,能夠明顯的增殖抑制作用，且呈現(xiàn)時間和劑量-效應(yīng)依賴關(guān)系。紫草素1～8ug/ml抑制率分別為23.0±8.2％～73.0±1.3%（P均<0.01）。

3、
　　2.Annexin V/PI分析結(jié)果顯示紫草素能夠誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡，Annexin V陽性細(xì)胞百分率明顯增加，凋亡率呈時間和劑量依賴性。經(jīng)紫草素濃度為1、2、4mg/ml時作用于HL-60細(xì)胞24、48、72小時后，凋亡率分別為1.7%～14.7%（P均<0.01）。
　　3.半定量RT-PCR結(jié)果顯示紫草素作用下，白血病HL-60細(xì)胞Bcl-2基因表達(dá)明顯下調(diào)，泳道灰度減去陰性對照后與β-actin條帶灰度的比