DC-CIK對(duì)白血病細(xì)胞HL-60殺傷作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究DC-CIK細(xì)胞對(duì)早幼粒白血病細(xì)胞株HL-60的殺傷作用，為開(kāi)展臨床細(xì)胞治療及腫瘤研究提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　對(duì)象及方法：
　　1.采集健康人外周血，提取單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），制備DC、CIK與DC-CIK細(xì)胞；采用流式細(xì)胞術(shù)鑒定其免疫表型；
　　2.采用流式細(xì)胞術(shù)分析CIK及DC-CIK細(xì)胞的增殖能力；
　　3.采用ELISA雙抗體夾心法檢測(cè)CIK及DC-CIK細(xì)胞分泌IL-12和IFN-γ水平。

2、
　　4.采用MTT比色法測(cè)定不同效靶比CIK和DC-CIK細(xì)胞對(duì)HL-60細(xì)胞株的殺傷活性。效靶比設(shè)計(jì)為：CIK/DC-CIK﹕HL-60分別為2.5﹕1、5﹕1、10﹕1及20﹕1，選擇臨床最適效靶比。
　　結(jié)果：
　　1.成功制備DC、CIK與DC-CIK細(xì)胞。其中DC細(xì)胞免疫表型為：CD1a+、CD83+、CD14+；CIK細(xì)胞免疫表型為：CD3+CD8+、CD3+CD56+。
　　2.DC-CIK細(xì)胞增

3、殖倍數(shù)高于CIK細(xì)胞增殖倍數(shù)（p＜0.05）。DC-CIK細(xì)胞培養(yǎng)12d、15d，CD3+CD8+細(xì)胞比例分別為（53.3±3.8）％和（71.8±1.8）%、CD3+CD56+細(xì)胞比例為（32.5±2.8）%和（48.6±2.2）%，顯著高于同期單獨(dú)培養(yǎng)的CIK細(xì)胞（39.9±3.1）%和（60.4±3.3）%、（21.4±2.0）%和（33.4±2.2）%（p＜0.05）；
　　3.培養(yǎng)第15d檢測(cè)DC-CIK細(xì)胞組IL-12

4、分泌水平為30.7±9.1pg/ml、IFN-γ分泌水平為438.1±213.4pg/ml均高于CIK細(xì)胞組IL-1210.1±0.4pg/ml和IFN-γ214.0±137.0pg/ml（p＜0.05）。
　　4.四種效靶比CIK/DC-CIK﹕HL-60分別為2.5﹕1、5﹕1、10﹕1及20﹕1均提示DC-CIK細(xì)胞殺傷率大于CIK細(xì)胞；DC-CIK細(xì)胞殺傷率分別為（19.1±2.0）%、（30.4±1.2）%、（43.5±

5、4.8）%、（55.6±4.5）%，均顯著高于CIK細(xì)胞殺傷率（12.9±4.4）%、（20.2±2.6）%、（32.4±3.8）%、（41.8±2.8）%（p＜0.05），DC-CIK組內(nèi)比較，其殺傷活性逐漸增加，但在10﹕1與20﹕1比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　1.成功制備了DC和CIK細(xì)胞，建立了DC-CIK細(xì)胞共培養(yǎng)體系。
　　2.DC-CIK細(xì)胞共培養(yǎng)后IL-12和IFN-γ分泌水平較單獨(dú)CIK細(xì)胞分