DADS作用人白血病HL-60細(xì)胞對DJ-1亞細(xì)胞定位表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究二烯丙基二硫（diallyl disulfide, DADS）作用于人白血病細(xì)胞株HL-60細(xì)胞對DJ-1蛋白亞細(xì)胞定位表達(dá)的影響，并對其相關(guān)分子機(jī)制做進(jìn)一步探討，為研究DJ-1蛋白的功能提供重要依據(jù)。
　　方法：收集不同時(shí)間組DADS處理的HL-60細(xì)胞，分離細(xì)胞漿、細(xì)胞核和線粒體成分，采用蛋白印跡法分別檢測細(xì)胞漿、細(xì)胞核及線粒體內(nèi)DJ-1蛋白的表達(dá)情況。運(yùn)用免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光化學(xué)方法檢測DADS處理前后HL-60

2、細(xì)胞中DJ-1定位表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：
　　1、DADS對HL-60細(xì)胞胞漿和胞核中DJ-1蛋白表達(dá)的影響
　　用1.25 mg·L-1DADS處理HL-60細(xì)胞0、4、8、12h后，蛋白印跡結(jié)果顯示：與未處理組比較，DADS作用8h后，細(xì)胞漿中DJ-1蛋白分布明顯減少（P<0.05），而DADS在處理HL-60細(xì)胞12h后，DJ-1在胞漿中表達(dá)量增加；DADS作用8h后，細(xì)胞核中DJ-1蛋白表達(dá)明顯增多（P<0.

3、05），而DADS在處理HL-60細(xì)胞12h后，在細(xì)胞核中表達(dá)量減少。免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與未處理組比較，1.25 mg·L-1DADS處理HL-60細(xì)胞8h后，細(xì)胞核中DJ-1表達(dá)增加。免疫熒光結(jié)果顯示，與未處理組比較，1.25 mg·L-1DADS處理HL-60細(xì)胞8h后，胞核區(qū)域熒光明顯增強(qiáng)，以上結(jié)果表明在DADS處理8h后，DJ-1從胞漿轉(zhuǎn)移至胞核，12h后 DJ-1又從胞核轉(zhuǎn)移至胞漿。不同濃度維甲酸組（2.5μmol·L

4、-1、5.0μmol·L-1、10μmol·L-1）處理HL-60細(xì)胞后，與未處理組比較，在5μmol·L-1、10μmol·L-1濃度組中，胞漿中DJ-1蛋白表達(dá)顯著減少(P<0.01)，在胞核中DJ-1蛋白的表達(dá)變化無顯著差異，表明維甲酸可以降低胞漿內(nèi)DJ-1的表達(dá)。
　　2、DADS對HL-60細(xì)胞線粒體中DJ-1蛋白表達(dá)的影響
　　蛋白印跡結(jié)果顯示，用1.25 mg·L-1DADS處理HL-60細(xì)胞0、4、8、12h

5、后，DJ-1蛋白表達(dá)水平無顯著差異（P>0.05），用1.25 mg·L-1、2.5 mg·L-1、5.0 mg·L-1、10.0 mg·L-1DADS處理HL-60細(xì)胞8h后，與未處理組相比，5.0 mg·L-1、10.0 mg·L-1DADS處理組線粒體中DJ-1蛋白表達(dá)明顯減少（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.1.25 mg·L-1DADS作用HL-60細(xì)胞8h DJ-1蛋白在胞漿中表達(dá)減少，而在胞核中表達(dá)量增加