人白血病細(xì)胞HL-60凋亡啟動時相的亞細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：運(yùn)用亞細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)，分析全反式維甲酸(ATRA)誘導(dǎo) HL-60細(xì)胞發(fā)生凋亡啟動時亞細(xì)胞組分蛋白的差異表達(dá)情況，初步探討凋亡啟動時相的分子機(jī)制。
　　方法：1.通過MTT檢測不同濃度的ATRA、不同時間對HL-60細(xì)胞的增殖抑制情況；2.以1μmol/L的ATRA誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞48h，建立細(xì)胞凋亡啟動模型，用流式細(xì)胞儀檢測其凋亡情況；3.利用超速離心法分離對照組與凋亡啟動時相的HL-60細(xì)胞核、膜和細(xì)胞器以及細(xì)

2、胞質(zhì)；4.運(yùn)用雙向電泳（2-DE）分離對照組與凋亡啟動時相的HL-60細(xì)胞總蛋白和亞細(xì)胞組分蛋白，Image Master2D Platinum6.0圖像軟件分析雙向電泳圖譜，選取差異表達(dá)蛋白；5.運(yùn)用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）技術(shù)鑒定目的蛋白，并經(jīng)NCBIr數(shù)據(jù)庫檢索。
　　結(jié)果：1.不同濃度的ATRA、不同時間均對 HL-60細(xì)胞的生長有抑制作用，并隨濃度、時間的增加，抑制作用也越顯著；2.以1μmol/L的ATR

3、A誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞48h早期凋亡比例為13.21％，晚期凋亡比例為3.49%；3.以1μmol/L的ATRA誘導(dǎo)不同時間的HL-60細(xì)胞形態(tài)存在明顯變化；4.利用差速離心法分離得到亞細(xì)胞組分經(jīng)SDS-PAGE分離后，各組分蛋白條帶之間存在差異；5.通過雙向電泳及軟件分析得到至少有34個差異表達(dá)蛋白，選取22個做質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)庫檢索，其中至少有16個蛋白與調(diào)控細(xì)胞的分化、增殖和凋亡有關(guān)。
　　結(jié)論：1.以1μmol/L的ATRA誘