二烯丙基二硫誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞分化的蛋白質(zhì)組研究.pdf

1、南華大學(xué)碩士學(xué)位論文二烯丙基二硫誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞分化的蛋白質(zhì)組研究姓名：何潔申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：蘇琦20040501何螭南華人學(xué)I詞等學(xué)力人員碩f：學(xué)位論文二烯丙基二硫誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞分化的差異蛋白質(zhì)組研究研究生：何潔導(dǎo)師：蘇琦教授中文摘要目的研究二烯丙基二硫(DADS)誘導(dǎo)人髓性白血病HL60細(xì)胞分化過程中差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，繪制蛋白質(zhì)差異表達(dá)圖譜，鑒定誘導(dǎo)分化有關(guān)蛋白，尋找相關(guān)生物標(biāo)記物，探討誘導(dǎo)分化的

2、分子機(jī)理。方法形態(tài)學(xué)觀察和硝基四氮噸藍(lán)(NBT)還原反應(yīng)鑒定DADS誘導(dǎo)HL60細(xì)胞分化；固相pH梯度(pH310)等電聚焦和125％SDS聚丙烯酰胺凝膠雙向電泳分離細(xì)胞總蛋白質(zhì)；銀染和考馬斯亮藍(lán)染色對(duì)凝膠上的蛋白質(zhì)進(jìn)行可視化檢測；運(yùn)用計(jì)算機(jī)輔助圖像分析軟件(PDQUEST)進(jìn)行銀染的蛋白表達(dá)圖譜分析：切割差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)，膠上原位酶解，通過基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI—TOF—MS)或毛細(xì)管高效液相色譜一電噴霧～四

3、極飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜(CapLC—QTOFMS)分析，并采用生物信息學(xué)方法搜索NCBInr、EMBL、SWISSPROT等數(shù)據(jù)庫，進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定。結(jié)果DADS誘導(dǎo)HL60細(xì)胞分化后，形態(tài)發(fā)生明顯變化，NBT還原能力明顯增強(qiáng)。雙向電泳分離對(duì)照組和處理組分別得到373(匹配率94％)、369(匹配率89％)個(gè)點(diǎn)。其中161個(gè)匹配的蛋白質(zhì)點(diǎn)存在表達(dá)量上的差異；與對(duì)照組比較，DADS處理組中29個(gè)點(diǎn)表達(dá)上調(diào)，132個(gè)點(diǎn)表達(dá)下調(diào)。通過質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)

4、庫搜索鑒定了其中的18個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)。其中g(shù)alectin10，異質(zhì)核核糖核蛋白DO，網(wǎng)格蛋白1和電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白a亞基表達(dá)明顯上調(diào)，而增殖細(xì)胞核抗原、蛋白酶體‘鏈、RNA結(jié)合蛋白調(diào)節(jié)亞基DJ1蛋白、LyGDI、Cofilin1、鈣網(wǎng)硬蛋白前體、碳酸酐酶II、醛縮酶A、磷酸丙糖異構(gòu)酶、3一磷酸甘油醛脫氫酶、Peroxiredoxinl、Peroxiredoxin3、鋅指蛋白93、腺苷酸激酶同工酶2則表達(dá)下調(diào)。這些蛋白功能分別與DNA復(fù)制、蛋