二烯丙基二硫誘導(dǎo)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡及機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究二烯丙基二硫 (DADS)誘導(dǎo)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡及其分子機(jī)制。 方法: MTT法檢測(cè)DADS對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用；AO/EB熒光染色法、流式細(xì)胞儀檢測(cè)MCF-7細(xì)胞的凋亡率；Western blot法檢測(cè)DADS對(duì)caspase-3、PARP剪切片斷的影響及對(duì)MAPKs通路相關(guān)蛋白,包括p-ERK、ERK、 p-p38、p38、p-JNK、JNK表達(dá)的影響。 結(jié)果：DADS對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MCF

2、-7細(xì)胞株生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，我們用DADS 50 μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-1、 300 μmol·L-1、400 μmol·L-1的濃度處理MCF-7細(xì)胞24、48、72 h, MTT法檢測(cè)OD值，結(jié)果顯示DADS能降低MCF-7細(xì)胞的增殖活性，其作用呈濃度和時(shí)間依賴性，與10％ FBS組相比有顯著性意義。AO/EB染色熒光顯微鏡觀察DADS對(duì)MCF-7細(xì)胞凋亡的影響，結(jié)果顯示：經(jīng)DADS

3、 處理后的細(xì)胞出現(xiàn)明顯的體積縮小，核碎裂，染色質(zhì)凝集等典型凋亡形態(tài)學(xué)特征。為了進(jìn)一步了解DADS對(duì)細(xì)胞凋亡的影響，本實(shí)驗(yàn)用流式細(xì)胞儀分析了細(xì)胞凋亡的情況：DADS 50 μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-1、 300 μmol·L-1、400 μmol·L-1處理MCF-7細(xì)胞24 h，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的凋亡，其凋亡率分別為3.74％、9.22％、20.2％、42％，與正常組（3.03％）相比，細(xì)胞凋亡

4、率增加（P＜0.05）。我們用不同濃度DADS 50 μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-1、400 μmol·L-1處理細(xì)胞24 h后， Western blot法檢測(cè)在100 μmol·L-1的DADS處理24 h后,35 kd的caspase-3出現(xiàn)17 kd的斷裂片斷, 200 μmol·L-1的DADS處理24 h后，116 kd的PARP出現(xiàn)85 kd的斷裂片斷，并隨濃度升高斷裂更明顯，而對(duì)照組

5、無斷裂片斷,只有分子量為35 kd和116 kd完整的caspase-3和PARP條帶。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，200 μmol·L-1 DADS處理MCF-7細(xì)胞12 h后，ERK1/2的磷酸化水平降低，總的ERK1/2的量沒有變化。200 μmol·L-1 DADS處理MCF-7細(xì)胞6 h后，JNK、p38的磷酸化水平明顯升高，總的p38、JNK的量沒有變化。200 μmol·L-1的DADS處理MCF-7細(xì)胞24 h后，Western b