二烯丙基二硫誘導人乳腺癌MCF-7細胞凋亡及機制的研究.pdf

1、目的：研究二烯丙基二硫 (DADS)誘導人乳腺癌MCF-7細胞凋亡及其分子機制。 方法: MTT法檢測DADS對MCF-7細胞增殖的抑制作用；AO/EB熒光染色法、流式細胞儀檢測MCF-7細胞的凋亡率；Western blot法檢測DADS對caspase-3、PARP剪切片斷的影響及對MAPKs通路相關蛋白,包括p-ERK、ERK、 p-p38、p38、p-JNK、JNK表達的影響。 結果：DADS對乳腺癌細胞株MCF

2、-7細胞株生長具有明顯的抑制作用，我們用DADS 50 μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-1、 300 μmol·L-1、400 μmol·L-1的濃度處理MCF-7細胞24、48、72 h, MTT法檢測OD值，結果顯示DADS能降低MCF-7細胞的增殖活性，其作用呈濃度和時間依賴性，與10％ FBS組相比有顯著性意義。AO/EB染色熒光顯微鏡觀察DADS對MCF-7細胞凋亡的影響，結果顯示：經DADS

3、 處理后的細胞出現明顯的體積縮小，核碎裂，染色質凝集等典型凋亡形態(tài)學特征。為了進一步了解DADS對細胞凋亡的影響，本實驗用流式細胞儀分析了細胞凋亡的情況：DADS 50 μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-1、 300 μmol·L-1、400 μmol·L-1處理MCF-7細胞24 h，流式細胞儀檢測細胞的凋亡，其凋亡率分別為3.74％、9.22％、20.2％、42％，與正常組（3.03％）相比，細胞凋亡

4、率增加（P＜0.05）。我們用不同濃度DADS 50 μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-1、400 μmol·L-1處理細胞24 h后， Western blot法檢測在100 μmol·L-1的DADS處理24 h后,35 kd的caspase-3出現17 kd的斷裂片斷, 200 μmol·L-1的DADS處理24 h后，116 kd的PARP出現85 kd的斷裂片斷，并隨濃度升高斷裂更明顯，而對照組

5、無斷裂片斷,只有分子量為35 kd和116 kd完整的caspase-3和PARP條帶。進一步研究發(fā)現，200 μmol·L-1 DADS處理MCF-7細胞12 h后，ERK1/2的磷酸化水平降低，總的ERK1/2的量沒有變化。200 μmol·L-1 DADS處理MCF-7細胞6 h后，JNK、p38的磷酸化水平明顯升高，總的p38、JNK的量沒有變化。200 μmol·L-1的DADS處理MCF-7細胞24 h后，Western b