鎘對MCF-7人乳腺癌細(xì)胞生長的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、近年來,環(huán)境污染問題日益嚴(yán)重。重金屬由于其蓄積作用,長期暴露在環(huán)境中污染農(nóng)作物和水源,對食品安全造成極大影響,嚴(yán)重威脅人體健康。流行病學(xué)資料顯示,鎘可能是乳腺癌的致病原因之一。乳腺癌是一種雌激素依賴疾病,因此鎘作為高度可疑的環(huán)境雌激素類物質(zhì)被研究者關(guān)注。
　　研究目的:
　　以MCF-7人乳腺癌細(xì)胞為研究對象,觀察鎘對細(xì)胞生長情況的影響,并進(jìn)一步探討其可能的作用機(jī)制。
　　研究方法:
　　1.用鎘處理MCF-7細(xì)

2、胞,實驗組選用10-5、10-6、10-7、10-8、10-9、10-10、10-11、10-12mol/L8個濃度,各處理12h、24h、48h、72h、96h,同時以雌二醇(10-9mol/L)為陽性對照,MTT法檢測鎘對細(xì)胞增殖的影響。
　　2.上步實驗篩選出能使細(xì)胞相對增殖率達(dá)到最大的鎘的濃度和作用時間,用雌激素受體拮抗劑ICI與鎘同時處理細(xì)胞,MTT法進(jìn)一步觀察細(xì)胞增殖情況,雌二醇為陽性對照。
　　3.劃痕實驗評價

3、鎘對細(xì)胞遷移能力的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況以及細(xì)胞周期變化。
　　4.Western-blot檢測雌激素受體α、雌激素受體β、Akt蛋白的表達(dá),以及ICI拮抗后蛋白表達(dá)的變化。
　　研究結(jié)果:
　　1.鎘能夠促進(jìn)MCF-7細(xì)胞增殖(P<0.05),其中10-6mol/L處理24h和10-9mol/L處理72h對細(xì)胞的促增殖效應(yīng)最明顯,相對增殖率分別為133％、138%,陽性對照雌二醇在各個時間點均能使細(xì)胞顯著增

4、殖;鎘與雌二醇相似,對MCF-7細(xì)胞的增殖作用都能被ICI阻斷。
　　2.細(xì)胞劃痕損傷后,10-9mol/L鎘處理72h能使MCF-7細(xì)胞遷移能力顯著增強(qiáng),劃痕傷口愈合率為(25.7±1.96)%,與對照組比較顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),而10-6mol/L鎘處理的MCF-7細(xì)胞劃痕損傷24h和72h劃痕傷口愈合率無顯著變化。
　　3.10-9mol/L鎘處理72h能顯著抑制MCF-7細(xì)胞死亡,死亡細(xì)胞比例較

5、對照組下降了16%,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。而10-6mol/L鎘處理24h對細(xì)胞死亡無顯著影響。
　　4.10-6mol/L鎘處理24h和10-9mol/L鎘處理72h均能使G1期細(xì)胞比例減少,G2期細(xì)胞比例增多,促進(jìn)MCF-7細(xì)胞周期轉(zhuǎn)化,使細(xì)胞增殖。其中,10-6mol/L鎘作用24h后,G1期細(xì)胞所占比例由對照組的(56.42±2.33)%減少到(51.20±1.95)%,而G2期細(xì)胞比例由對照組的(27.35

6、±1.69)%增加到(32.06±1.32)%。10-9mol/L鎘作用72h后,G1期細(xì)胞所占比例由對照組的(55.39±2.12)%減少到(50.08±2.06)%,而G2期細(xì)胞比例由對照組的(27.21±2.60)%增加到(34.14±2.18)%。
　　5.10-6mol/L鎘與雌二醇處理MCF-7細(xì)胞24h后均能顯著增加ERα蛋白表達(dá)(P<0.05),同時該效應(yīng)能夠被ICI阻斷;10-9mol/L鎘與雌二醇處理細(xì)胞72h

7、后ERα蛋白表達(dá)顯著增加(P<0.05),該效應(yīng)同樣也能被ICI阻斷;而ERβ蛋白的表達(dá)在實驗各組均無顯著改變。
　　6.10-6mol/L鎘處理細(xì)胞4h和24h之后,P-Akt蛋白的表達(dá)顯著增加(P<0.05);10-9mol/L鎘處理72h,也能使P-Akt蛋白的表達(dá)升高(P<0.05),鎘的效應(yīng)能夠被ICI阻斷。并且雌二醇在上述三個時間點也和鎘具有同樣的效應(yīng)。
　　結(jié)論:
　　1.鎘能夠促進(jìn)體外培養(yǎng)的MCF-7人