淫羊藿素對雌激素依賴性乳腺癌細胞MCF-7作用機制研究.pdf

1、目的:研究不同濃度的淫羊藿素(Icaritin,ICT)單獨應用和與雌激素聯(lián)合應用,對乳腺癌細胞 MCF-7的增殖和抑制作用,并分析該過程中雌激素受體ERα的表達情況,初步探討ICT的雌激素作用和抗雌激素作用發(fā)生的可能途徑,為可能尋找一個與手術配合來治療乳腺癌的方法提供理論依據(jù)。
　　方法:1.體外培養(yǎng)依賴雌激素的乳腺癌細胞MCF-7細胞,用不同濃度的ICT(10-10,10-9,10-8,10-7,10-6,5×10-6,10-

2、5),不同濃度的E2(10-13,10-12,10-11,10-10,10-9,10-8,10-7,10-6)以及10-9的 E2+不同濃度的ICT(10-7,10-6,5×10-6,10-5,5×10-5)分別作用于MCF-7細胞6天后,倒置顯微鏡下觀察MCF-7細胞的形態(tài)學變化。
　　2.用不同濃度的 ICT(10-10,10-9,10-8,10-7,10-6,5×10-6,10-5,5×10-5),不同濃度的E2(10-13

3、,10-12,10-11,10-10,10-9,10-8,10-7,10-6)以及10-9的E2+不同濃度的ICT(10-8,10-7,10-6,5×10-6,10-5,5×10-5)分別作用于MCF-7細胞4天,5天,6天后,應用MTT法檢測細胞增殖抑制的變化,并計算增殖率和抑制率。3.10-9的E2+不同濃度的ICT(10-7,10-6,5×10-6,10-5,)作用MCF-7細胞6天后,Hoechst33342染色觀察凋亡細胞,并

4、計算凋亡率。
　　4.淫羊藿素與雌二醇聯(lián)合應用時,用熒光素酶報告基因檢測試劑盒檢測ERα報告基因表達活性。
　　5.RT-PCR檢測淫羊藿素和雌激素聯(lián)合應用MCF-7細胞后,雌激素受體ERα表達的變化。
　　結果:1.雌激素單獨處理 MCF-7細胞后,細胞分裂相變多,部分細胞變?yōu)槎噙呅?隨著雌激素E2濃度的增加,細胞數(shù)量越來越多,當E2濃度達到10-9時,細胞無論從數(shù)量還是分裂相上都達到最大。之后細胞數(shù)量和分裂相又逐漸

5、變少。
　　2.淫羊藿素單獨處理MCF-7細胞后,細胞分裂相變多,部分細胞變?yōu)槎噙呅?隨著雌激素ICT濃度的增加,細胞數(shù)量越來越多,當ICT達到10-5時,細胞分裂相達到最大,之后細胞數(shù)量和分裂相又逐漸變少。
　　3.10-9E2+不同濃度的 ICT(10-7,10-6,5×10-6,10-5,)作用 MCF-7細胞后,細胞分裂相變少,部分細胞變圓,當濃度為10-5時,細胞漂浮和壞死現(xiàn)象最為明顯。
　　4.MTT比色法

6、測定結果顯示在淫羊藿素濃度10-6-5×10-5mol/l濃度范圍內可以不同范圍的促進MCF-7細胞增殖,當淫羊藿素濃度為10-5mol/l,促增殖活性最為明顯。與雌激素E2相比,淫羊藿素具有較弱的雌激素活性。
　　5.淫羊藿素與雌二醇聯(lián)合應用于 MCF-7細胞,MTT比色法測定結果顯示,當濃度為10-9mol/l的E2與濃度大于10-9mol/l的ICT聯(lián)合應用于MCF-7細胞時, MCF-7細胞增值率明顯低于相同濃度的E2單獨

7、作用時。
　　6.ICT單獨應用時能誘導ERα報告基因的表達,當ICT與E2合用時,ICT對E2激活的ERα報告基因又抑制作用。
　　7.淫羊藿素與雌二醇聯(lián)合應用于MCF-7細胞時,RT-PCR檢測結果顯示能抑制ERα的表達。
　　結論:1.淫羊藿素在一定濃度范圍內可以促進MCF-7細胞增殖,具有一定的雌激素樣作用。
　　2.淫羊藿素與雌二醇聯(lián)合作用時,可以拮抗前者的雌激素作用,抑制后者的促MCF-7細胞增殖作用