苦瓜多糖和皂苷的提取純化及對乳腺癌細胞MCF-7作用機理研究.pdf

1、苦瓜具有一定的食療和藥理功效，苦瓜多糖和苦瓜皂苷類物質更是具有一定的功能作用，他們具有一定的降血糖，增加抵抗力，抗病毒以及抗癌等功效。而乳腺癌在女性人群中最為常見，是及其難以治愈的疾病，也是導致死亡的原因之一。采用苦瓜多糖和皂苷對乳腺癌細胞MCF-7進行作用，可以有效地降低乳腺癌細胞MCF-7的增值，尤其是苦瓜皂苷作用更佳。
　　本論文以苦瓜多糖和皂苷為研究對象，通過大孔吸附樹脂對苦瓜多糖純化進行響應面優(yōu)化試驗，研究洗脫劑濃度、上

2、樣體積和洗脫劑用量對苦瓜多糖純化效果的影響，并確定了優(yōu)化的最佳工藝參數；采用泡沫分離技術對苦瓜皂苷進行進一步的純化，研究不同物質量濃度、PH和溫度對純化效果的影響，通過正交試驗確定最佳的純化工藝條件；采用MTT法研究苦瓜多糖和苦瓜皂苷對乳腺癌細胞的增值抑制效果，并進一步應用HE染色、流式細胞技術和western-blot方法，對苦瓜皂苷抑制乳腺癌細胞增值機理進行了進一步的探討。通過以上實驗得出以下結論：
　?。?）通過對苦瓜多糖的

3、純化研究可知：在室溫條件下多糖上樣的質量濃度為2.0mg/mL，多糖上樣體積為3BV，洗脫劑濃度為50％，洗脫劑體積為2BV時，純化效果最好，多糖含量從26.01%提高到66.5%。純化前后苦瓜多糖中蛋白質含量分別為4.12%和5.60%，水分含量分別為19.2%和18.9%。純化后苦瓜蛋白含量反而增加，水分含量基本保持不變。
　　（2）通過對苦瓜皂苷的純化研究可知：在物質量濃度為1.6mg/ml、PH為7.5和溫度為30℃時，對

4、苦瓜皂苷的純化效果最好，純度為92.8%；定性實驗驗證所提取的物質為皂苷類物質；經HPLC圖譜分析，確定所提的苦瓜皂苷成分與張玉嬋等提取的皂苷成分一致。說明苦瓜皂苷提取純化技術的穩(wěn)定性。
　?。?）MCF-7增殖抑制試驗結果表明：糖純度為26.01%，多糖作用濃度200μg/ml時，對MCF-7的抑制率達到最大值，為49.5%；多糖純度為66.5%，多糖作用濃度僅為6.25μg/ml，對MCF-7的抑制率可達到最大值，為46.5%

5、。純化后的苦瓜多糖用量比純化前的用量顯著降低。這與苦瓜多糖的純度有直接的關系；苦瓜皂苷對乳腺癌細胞的作用呈現時間和劑量依賴性，經24h和48h作用后，抑制率隨劑量的增加而增大，且當苦瓜皂苷作用濃度達到500μg/ml時，兩個不同作用時間段的抑制率相差不大，最佳抑制率為86%。
　?。?）HE試驗結果表明，皂苷作用后的細胞呈現明顯的胞漿濃縮、細胞質連接不緊密，細胞變小，核破碎，并有凋亡小體出現；經流式細胞術可檢測到細胞周期的變化，經