氨氯地平對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞G1期阻滯作用及機(jī)理研究.pdf

1、目的：觀察鈣通道阻滯劑(calcium channel blocker,CCB)氨氯地平對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7抗體外增殖和細(xì)胞周期阻滯作用,并初步探討其可能機(jī)制,為鈣通道阻滯劑在腫瘤化療方面的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：體外培養(yǎng)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞；在不同濃度及時(shí)間的氨氯地平作用下,MTT法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖,分別觀察各濃度及時(shí)間點(diǎn)腫瘤細(xì)胞的增殖情況,用以測(cè)算氨氯地平對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖作用的IC50值(即半數(shù)

2、抑制濃度),并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線；流式細(xì)胞儀(FCM)分析細(xì)胞作用周期；免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞周期蛋白cyclinD1,p21和p53的蛋白表達(dá)；RT-PCR技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白cyclinD1和p21在mRNA水平的表達(dá)；并用Western blot檢測(cè)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白cyclinD1和p21的蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：MTT結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,氨氯地平可明顯抑制人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增殖,且成劑量和時(shí)間依賴性,藥物作用

3、48h測(cè)得其IC50值為14.439μmol/L；流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期結(jié)果顯示,氨氯地平可使人乳腺癌MCF-7細(xì)胞被阻滯于G1期,分別經(jīng)終濃度為7.22μmol/L(1/2IC50)、14.439μmol/L(IC50)、28.88μmol/L(2IC50)的氨氯地平作用人乳腺癌MCF-7細(xì)胞48h可見,在各細(xì)胞時(shí)相中,G0/G1期細(xì)胞比例較對(duì)照組有明顯增高(P<0.05)；同時(shí),經(jīng)相同條件藥物作用的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞,RT-PC

4、R、免疫細(xì)胞化學(xué)和Western blot檢測(cè)結(jié)果亦表明,與對(duì)照組相比,氨氯地平能顯著降低人乳腺癌MCF-7細(xì)胞G1期相關(guān)蛋白cyclinD1在mRNA及蛋白水平的表達(dá),并升高p21在mRNA及蛋白水平的表達(dá)和上調(diào)p53的蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)論：鈣通道拮抗劑氨氯地平對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7具有體外抗增殖作用,它通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞作用周期,減少細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期,從而使細(xì)胞被阻滯于G1期。其G1期阻滯機(jī)制可能與通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期相關(guān)蛋白