鹽酸小檗堿對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞裸鼠移植瘤的作用研究.pdf

1、背景:
　　乳腺癌是一種女性常見(jiàn)的惡性腫瘤，嚴(yán)重影響身心健康甚至危害生命，其在女性癌癥發(fā)病率中位居第一。乳腺癌的治療主要以手術(shù)為主，并且配合術(shù)后化療、靶向治療等綜合療法，但放、化療過(guò)程中的不良反應(yīng)以及多藥物耐藥現(xiàn)象所導(dǎo)致的治療失敗仍是臨床需進(jìn)一步解決的問(wèn)題。因此，尋找有效、低毒、天然、副作用小的中藥治療乳腺癌及其相關(guān)的研究已成為一個(gè)緊迫的問(wèn)題。
　　小檗堿又名黃連素，是一種常見(jiàn)的異喹啉類生物堿，從黃蓮、黃柏等中草藥中提取獲得

2、，具有抗病原微生物和抗菌的功效。小檗堿可以通過(guò)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞增殖、抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移以及增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性等方式起一定的抗腫瘤作用。
　　小檗堿與乳腺癌之間的關(guān)系是目前的研究熱點(diǎn)，體內(nèi)研究尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，本課題希望通過(guò)將人乳腺癌細(xì)胞MCF-7接種于裸鼠皮下，建立裸鼠乳腺癌動(dòng)物模型，研究鹽酸小檗堿對(duì)MCF-7乳腺癌小鼠體內(nèi)產(chǎn)生的作用與影響。
　　目的:
　　本課題通過(guò)將人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7

3、接種于裸鼠背部皮下，建立乳腺癌動(dòng)物模型，研究鹽酸小檗堿對(duì)MCF-7乳腺癌小鼠體內(nèi)產(chǎn)生的作用與影響。
　　方法:
　　一、在小鼠右背部皮下接種細(xì)胞，建立人乳腺癌MCF-7移植瘤裸鼠模型，計(jì)算出藥物的抑瘤療效(TGI)。
　　二、應(yīng)用HE染色法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組的裸鼠移植瘤組織的染色情況。
　　三、應(yīng)用TUNEL染色法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組的裸鼠移植瘤組織的細(xì)胞凋亡情況。
　　四、應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組的裸鼠移植瘤組織的細(xì)

4、胞周期情況。
　　五、應(yīng)用免疫組化SP法、Western blot檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組的裸鼠移植瘤組織的MMP-2、MMP-9、p53、EGFR蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1、裸鼠移植瘤生長(zhǎng)情況:(1)每組大鼠在第21天時(shí)的體重均比第1天有所下降，各組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。(2)五組裸鼠的體積差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2、各藥物組的腫瘤抑制率:B1、B2、B3、C組的TGI值分別是5.55％

5、、4.91％、58.88％、67.72％，差異均有顯著性差異(P＜0.01)。
　　3、裸鼠移植瘤組織病理學(xué)變化:(1)肉眼:移植瘤呈圓形、類圓形或分葉狀生長(zhǎng)。(2)光鏡:腫瘤細(xì)胞略增大，治療組異型細(xì)胞減少，瘤組織結(jié)構(gòu)破壞。
　　4、TUNEL染色結(jié)果顯示:各組間細(xì)胞凋亡指數(shù)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.01)。
　　5、流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:(1)S期所占細(xì)胞周期分布經(jīng)方差分析顯示:各組間比較均有顯著性差異(P＜0.01)

6、;(2)G0/G1期所占細(xì)胞周期分布經(jīng)方差分析顯示:各組間比較均有顯著性差異(P＜0.01)。
　　6、免疫組化、Western blot結(jié)果顯示:MMP-2、MMP-9、P53、EGFR蛋白在對(duì)照組中的表達(dá)量顯著高于其他實(shí)驗(yàn)組，其組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.成功建立了裸鼠人乳腺癌MCF-7細(xì)胞皮下移植瘤疾病模型。
　　2.小檗堿能夠抑制MCF-7乳腺癌裸鼠腫瘤生長(zhǎng)，抑制作用呈濃度