共軛亞油酸異構(gòu)體及異油酸對人乳腺癌MCF-7細胞的促凋亡作用及機理研究.pdf

1、共軛亞油酸（Conjugated linoleic acid，CLA）是一種功能性油脂，是食物中的天然成分，對人體無毒副作用，主要存在于牛、羊等瘤胃動物的乳脂及肉制品中。近年來大量動物試驗表明CLA具有抗癌、抗動脈粥樣硬化、降低脂肪沉積等重要生理功能。異油酸（Vaccenic acid，VA，t11-C18:1）是一種天然反式脂肪酸，目前關于反式脂肪酸與癌癥的關系還尚不明確，需進一步深入研究。本文應用人乳腺癌MCF-7細胞為體外模型，用

2、MTT法、熒光染色及流式細胞術比較了3種CLA異構(gòu)體（c9,t11-CLA，t10,c12-CLA，t9,t11-CLA）及2種反式脂肪酸（反油酸、異油酸）對乳腺癌細胞MCF-7細胞生長、凋亡及細胞周期的影響，以篩選出更有效抗癌的CLA異構(gòu)體，并探討反油酸、異油酸對MCF-7細胞的影響。另外，運用RT-PCR和Western-blot方法研究3種CLA單體激活PPARγ的能力和PPARγ調(diào)控凋亡相關基因和蛋白表達之間的相互關系，從基因和

3、蛋白水平闡明CLA單體及異油酸誘導人乳腺癌細胞MCF-7凋亡的可能機制，為盡早將這一天然產(chǎn)物應用于乳腺癌的防治提供實驗依據(jù)。實驗結(jié)果如下：
　　3種CLA異構(gòu)體及反式脂肪酸VA作用MCF-7細胞48 h后，均可抑制MCF-7細胞增殖并促進細胞凋亡，且抑制作用呈劑量依賴性，但CLA的抑制作用顯著強于VA。在濃度≤50μmol/L時，t10,c12-CLA的抑制作用強于c9,t11-CLA，而≥100μmol/L時，c9,t11-CL

4、A的抑制作用強于t10,c12-CLA。t9,t11-CLA單體在濃度為50μmol/L時對MCF-7細胞的增殖抑制率就達到了34.01％，它在抑制MCF-7細胞增殖、促進細胞凋亡方面是最有效的CLA單體。EA作用MCF-7細胞48 h后，則表現(xiàn)出在一定劑量范圍內(nèi)促進MCF-7細胞增殖。與對照組相比，各CLA單體及VA組隨著作用濃度的增加，MCF-7細胞G0/G1期縮短，S期延長，顯然，CLA及VA可將細胞阻滯在S期，阻滯了DNA合成，

5、不能繼續(xù)完成下面的細胞周期活動，從而抑制細胞增殖。由此可以推測CLA及VA可能通過影響細胞周期進程從而抑制細胞分裂增殖并誘導凋亡。
　　不同CLA異構(gòu)體能促進MCF-7細胞中PPARγ基因及其蛋白的表達，而且PPARγ的變化與促凋亡基因bcl-xS的變化趨勢相一致。反式脂肪酸VA也能促進促凋亡基因bcl-xS mRNA及蛋白Bax的表達。100μmol/L c9,t11-CLA，50μmol/L t10,c12-CLA，50和10

6、0μmol/L t9,t11-CLA組的抑凋亡基因bcl-xL mRNA及其蛋白Bcl-2表達均下降，其中t9,t11-CLA組，抑凋亡基因bcl-xL mRNA及其蛋白表達水平明顯降低。從bcl-xS與bcl-xL mRNA及其蛋白Bax與Bcl-2的表達比例可知， VA和 c9,t11-CLA在100μmol/L時表達最高，而 t10,c12-CLA和t9,t11-CLA則在50μmol/L時表達最高。結(jié)果表明VA和3種CLA異構(gòu)體