兒童急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析.pdf

1、研究目的:
　　 通過(guò)差異蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)比較獲得初診急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)患兒白血病細(xì)胞與健康兒童白細(xì)胞表達(dá)蛋白質(zhì)譜之間的差異蛋白,為深入研究?jī)和疉LL發(fā)生發(fā)展機(jī)制、探索新的診療途徑提供依據(jù)。
　　 研究對(duì)象與方法:
　　 1.分別留取15例初診ALL患兒的骨髓細(xì)胞(原始+幼稚淋巴細(xì)胞比率>90％)為實(shí)驗(yàn)組與15例正常健康體檢兒童外周血細(xì)胞為正常對(duì)照組,ALL患兒均經(jīng)骨髓細(xì)胞學(xué)檢查與免疫學(xué)分型檢查確診,且無(wú)

2、多系增生現(xiàn)象。
　　 2.用淋巴細(xì)胞分離液獲取兩組單個(gè)核細(xì)胞標(biāo)本并裂解獲得其內(nèi)表達(dá)的蛋白質(zhì),進(jìn)行雙向凝膠電泳(2-DE),保證每例樣本有3次獨(dú)立重復(fù)試驗(yàn)。
　　 3.掃描獲得凝膠圖像,應(yīng)用ImageMaster2D Platinum7.0 Training軟件,根據(jù)體積差異倍數(shù)≥2及Anova P<0.05設(shè)置軟件檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn),分析獲得兩組差異蛋白點(diǎn)。
　　 4.手工切點(diǎn)進(jìn)行膠內(nèi)酶切獲取蛋白肽段,進(jìn)行MALDI-TO

3、F-MS質(zhì)譜分析,連接IPI_human human_v3.07數(shù)據(jù)庫(kù)鑒定蛋白質(zhì)。
　　 結(jié)果:
　　 1.實(shí)驗(yàn)組與正常對(duì)照組分別檢測(cè)到(889±52)、(834±41)個(gè)蛋白點(diǎn)。比較獲得實(shí)驗(yàn)組較正常對(duì)照組有4個(gè)高表達(dá)蛋白點(diǎn)和11個(gè)低表達(dá)蛋白點(diǎn),等電點(diǎn)多在pH4.5～7之間,分子質(zhì)量集中在18.4～45KD范圍內(nèi)。
　　 2.質(zhì)譜分析、數(shù)據(jù)庫(kù)鑒定獲得2個(gè)高表達(dá)蛋白Glutathione S-transferase

4、 P(谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶P)、Prohibitin(抑制素)及6個(gè)低表達(dá)蛋白60S acidicribosomal protein P0(60S酸性核糖體蛋白PO)、Pyridoxine-5'-phosphateoxidase(磷酸吡哆醇氧化酶)、Triosephosphate isomerase1 variant(磷酸甘油醛異構(gòu)酶-1)、Peroxiredoxin4(過(guò)氧化還原酶4)、Actin,cytoplasmic(細(xì)胞質(zhì)肌動(dòng)蛋白)

5、、Hypothetical protein FLJ26567(假設(shè)蛋白FLJ26567)。
　　 結(jié)論:
　　 1.ALL患兒與健康兒童細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)存在明顯差異,并鑒定獲得8種差異蛋白,與兒童ALL的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。其中谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶P、細(xì)胞質(zhì)肌動(dòng)蛋白與兒童ALL的關(guān)系與既往非蛋白質(zhì)組學(xué)研究其與白血病的關(guān)系結(jié)果相似,抑制素、60s酸性核糖體蛋白PO、磷酸吡哆醇氧化酶、磷酸甘油醛異構(gòu)酶-1、過(guò)氧化還原酶4與假設(shè)蛋白FLJ2