二烯丙基二硫下調(diào)DJ-1抑制人白血病細(xì)胞HL-60增殖及誘導(dǎo)分化.pdf

1、目的:研究二烯丙基二硫（DADS）通過(guò)下調(diào)DJ-1對(duì)人白血病細(xì)胞系HL-60增殖抑制及誘導(dǎo)分化的影響，闡明DADS誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞分化的分子機(jī)制，為腫瘤誘導(dǎo)分化治療提供一個(gè)新思路。
　　方法:通過(guò)細(xì)胞形態(tài)法觀察細(xì)胞分化；RT-PCR、Western blot、免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)DADS對(duì)HL-60細(xì)胞DJ-1表達(dá)的影響；針對(duì)DJ-1 mRNA序列設(shè)計(jì)合成siRNA轉(zhuǎn)染人白血病細(xì)胞HL-60，RT-PCR鑒定選取干擾效果最好的1組轉(zhuǎn)染

2、HL-60細(xì)胞，故后續(xù)實(shí)驗(yàn)分組為對(duì)照組、干擾組、脂質(zhì)體組及陰性對(duì)照組；利用MTT法檢測(cè)DADS對(duì)HL-60細(xì)胞的生長(zhǎng)情況；硝基藍(lán)四氮唑（NBT）還原反應(yīng)鑒定細(xì)胞分化；RT-PCR、Western blot檢測(cè)基因沉默效果。
　　結(jié)果:DADS可以誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞向成熟粒細(xì)胞系樣分化。
　　RT-PCR、Western blot顯示，DADS呈時(shí)間依賴性抑制DJ-1的表達(dá)（P<0.05），免疫細(xì)胞化學(xué)顯示未處理組細(xì)胞DJ-1

3、蛋白表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性，DADS處理后，DJ-1表達(dá)明顯降低。
　　MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況發(fā)現(xiàn)干擾組細(xì)胞生長(zhǎng)減慢（P<0.05），脂質(zhì)體組細(xì)胞、陰性對(duì)照組細(xì)胞與空白對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)差異無(wú)顯著性意義。
　　NBT結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染DJ-1-siRNA-HL-60細(xì)胞經(jīng)DADS處理后NBT還原反應(yīng)率增加，與未經(jīng)DADS處理的細(xì)胞比較差異有顯著性意義（P<0.05），且與陽(yáng)性對(duì)照組ATRA處理后NBT還原反應(yīng)率比較差異無(wú)顯著性差異。

4、　　將熒光標(biāo)記DJ-1-siRNA轉(zhuǎn)染HL-60細(xì)胞，RT-PCR篩選鑒定結(jié)果顯示干擾組3的HL-60細(xì)胞中mRNA水平最低（P<0.01）。
　　沉默DJ-1基因，RT-PCR、Western blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染了DJ-1-SiRNA的HL-60細(xì)胞與空白對(duì)照組人HL-60細(xì)胞之間DJ-1的表達(dá)差異有顯著性意義（P<0.05）；而脂質(zhì)體組、空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組間人HL-60細(xì)胞之間其表達(dá)的差異均無(wú)顯著性意義。
　　結(jié)論