iASPP對(duì)白血病細(xì)胞的增殖凋亡的作用及DJ-1基因在急性白血病中的表達(dá)及其對(duì)白血病細(xì)胞增殖凋亡的影響.pdf

1、研究目的： iASPP是p53凋亡促進(jìn)蛋白(apoptosisstimulatingproteinofp53，ASPP)家族的抑制性成員(inhibitorymemberofASPPofp53family，iASPP)，是新發(fā)現(xiàn)的一個(gè)p53拮抗基因，它存在于從線蟲(chóng)到人類等多種生物細(xì)胞內(nèi)，高度保守。作為一個(gè)p53重要的癌癥抑制因子，iASPP參與多種腫瘤的發(fā)生。我們實(shí)驗(yàn)室通過(guò)半定量RT-PCR方法檢測(cè)了iASPP在急性白血病(ac

2、uteleukemia，AL)細(xì)胞中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)AL患者iASPP表達(dá)顯著高于正常組及AL完全緩解組，這一結(jié)果提示iASPP基因過(guò)表達(dá)可能與AL的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。本研究通過(guò)RNA干擾下調(diào)iASPP癌基因在白血病細(xì)胞系中的表達(dá)，探索iASPP在AL發(fā)生中的作用機(jī)制，以及p53在iASPP調(diào)節(jié)通路中的作用。 研究方法： 應(yīng)用RNA干擾的方法抑制癌基因iASPP在p53野生型白血病細(xì)胞系Nalm6和p53突變型白血病細(xì)胞系K

3、562中的表達(dá)，RT-PCR測(cè)定iASPPmRNA水平，Westernblot檢測(cè)iASPP蛋白水平。觀察細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)改變，流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期和分化抗原的表達(dá)，集落形成實(shí)驗(yàn)分析細(xì)胞增殖能力的改變，AnnexinV標(biāo)記，流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡。 研究結(jié)果： 1)iASPP特異性的小分子雙鏈RNA(siRNA)處理白血病細(xì)胞后，iASPPmRNA及蛋白水平均下調(diào)。 2)與對(duì)照組相比，iASPPsiRNA處理組的

4、細(xì)胞集落形成能力明顯下降，K562細(xì)胞集落數(shù)由908±20.95/孔降至663.3±10.6/孔，下降26.95％(P＜0.05)，Nalm6細(xì)胞的集落數(shù)變化更為明顯，由484.7±14.6/孔降至158±7/孔(P＜0.05)，下降了674％。 3)iASPP表達(dá)下調(diào)增強(qiáng)了p53野生型白血病細(xì)胞系Nalm6對(duì)化療藥物依托泊甙(VP16)和柔紅霉素(DNR)的敏感性。與iASPPsiRNA和VP16單獨(dú)處理組相比，聯(lián)合使用iAS

5、PPsiRNA和VP16時(shí)，凋亡細(xì)胞比例明顯升高，細(xì)胞早期凋亡率分別由(9.43±3.86)％和(34.11±9.9)％升高到(52.29±6.79)％(P＜0.01，P＜0.05)；同樣，與iASPPsiRNA和DNR單獨(dú)處理組相比，聯(lián)合使用iASPPsiRNA和DNR時(shí)，凋亡細(xì)胞比例也明顯升高，細(xì)胞早期凋亡率分別由(8.4±3.0)％和(23.7±2.7)％升高到(45.1±4.5)％(P＜0.01，P＜0.01)。而在p53突變型

6、白血病細(xì)胞系K562中，iASPPsiRNA不能顯著增強(qiáng)白血病細(xì)胞對(duì)VP16和DNR的敏感性(P＞0.05)，提示p53表達(dá)在iASPP介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中發(fā)揮作用。 4)RT-PCR結(jié)果顯示，化療藥物VP16和DNR作用于Nalm6和K562細(xì)胞后，并不影響iASPP在細(xì)胞中的表達(dá)(P＞0.05)。 5)Nalm6及K562細(xì)胞中凋亡相關(guān)基因c-Myc、bcl-2的mRNA表達(dá)水平隨著iASPP的下調(diào)而下調(diào)。c-Myc分別