PML(ΔNLS)和氯化鋰對(duì)白血病NB4細(xì)胞增殖與凋亡影響的研究.pdf

1、本文分析了PML(ΔNLS)和氯化鋰對(duì)白血病NB4細(xì)胞增殖與凋亡影響。本研究分為兩個(gè)部分：
　　第一部分：重組慢病毒LV5-PML（ΔNLS）的構(gòu)建及其對(duì)NB4細(xì)胞增殖與凋亡的影響。
　　目的：通過(guò)重組慢病毒介導(dǎo)的PML(ΔNLS)過(guò)表達(dá)，研究其對(duì)白血病NB4細(xì)胞增殖與凋亡的影響，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行探討。
　　方法：以真核質(zhì)粒pCMV-HA-PML(ΔNLS)為PCR反應(yīng)模板，體外擴(kuò)增PML（ΔNLS）基因，克隆入慢病

2、毒載體LV5-EF1a-GFP/puro,與包裝輔助質(zhì)粒pHelper1.0、pHelper2.0在脂質(zhì)體2000的作用下共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，包裝病毒。利用重組慢病毒LV5-PML（ΔNLS）感染NB4細(xì)胞，RT-PCR法驗(yàn)證PML（ΔNLS）mRNA的轉(zhuǎn)錄程度，Western blot檢測(cè)PML（ΔNLS）、Akt、p-Akt(ser473)、S6和 p-S6(ser235/236)蛋白表達(dá)的變化。CCK-8實(shí)驗(yàn)觀察各組細(xì)胞增殖活力;

3、100 nmol/L雷帕霉素處理各組細(xì)胞，24h后流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡和周期的變化。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建攜帶PML（ΔNLS）的慢病毒，病毒感染NB4細(xì)胞，感染效率達(dá)82.74％，LV5-PML（ΔNLS）攜帶的PML（ΔNLS）能夠在NB4細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)；感染 LV5-PML（ΔNLS）的 NB4細(xì)胞中p-Akt(ser473)和 p-S6(ser235/236)蛋白表達(dá)上升(P<0.05)，而 Akt和 S6蛋白表達(dá)無(wú)明顯變

4、化；CCK-8結(jié)果顯示，與未感染組和感染 LV5-NC組相比，感染LV5-PML(ΔNLS)組NB4細(xì)胞增殖活力明顯上升(P<0.05)；流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，感染重組慢病毒PML(ΔNLS)組G1期細(xì)胞比例下降，進(jìn)入S期細(xì)胞比例增多，且凋亡率明顯低于感染LV5-NC組和未感染組(P<0.05)。
　　結(jié)論：成功構(gòu)建了重組慢病毒PML（ΔNLS），PML(ΔNLS)過(guò)表達(dá)可通過(guò)活化Akt信號(hào)通路促進(jìn)NB4細(xì)胞體外增殖，降低其凋亡率,

5、并影響S6蛋白磷酸化。
　　第二部分：氯化鋰對(duì)NB4細(xì)胞增殖與凋亡的作用。
　　目的：利用氯化鋰處理NB4細(xì)胞，探討其對(duì)NB4細(xì)胞增殖與凋亡的影響。
　　方法：以0-40mmol/L濃度的氯化鋰作用于NB4細(xì)胞，培養(yǎng)24 h， CCK-8實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞增殖情況,Western blot檢測(cè)各種細(xì)胞Akt1蛋白表達(dá)水平。以20 mmol/L濃度的氯化鋰作用于NB4細(xì)胞，培養(yǎng)24 h, FCM法分析細(xì)胞凋亡與周期變化， We

6、stern blot檢測(cè)各組細(xì)胞β-catenin, p-GSK-3, GSK-3 and c-Myc蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：0-40 mmol/L氯化鋰抑制NB4細(xì)胞增殖，使Akt1蛋白表達(dá)下降。20 mmol/L氯化鋰作用于NB4細(xì)胞后，細(xì)胞凋亡率上升，細(xì)胞周期阻滯在G2/M期，c-Myc蛋白表達(dá)下降，p-GSK-3，β-catenin蛋白表達(dá)上調(diào)，GSK-3β蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化。
　　結(jié)論：氯化鋰可通過(guò)抑制GSK-3