小檗胺誘導(dǎo)白血病細(xì)胞株NB4細(xì)胞凋亡及其機(jī)制的研究.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文小檗胺誘導(dǎo)白血病細(xì)胞株NB4細(xì)胞凋亡及其機(jī)制的研究姓名：何智文申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：內(nèi)科學(xué)（血液?。┲笇?dǎo)教師：趙小英20040501雯塑堅(jiān)叁蘭堡主堂篁堡莖材料與實(shí)驗(yàn)方法小檗胺粉劑由撫順中藥廠惠贈(zèng)，生理鹽水調(diào)至工作母液濃度lmg／ml，實(shí)驗(yàn)濃度范圍O～256“g／m1，主要實(shí)驗(yàn)濃度為299／ml、499／ml、899／ml、1299／ml和1699／ml，監(jiān)測(cè)時(shí)間范圍O～72小時(shí)，主要時(shí)間監(jiān)測(cè)點(diǎn)為0、6、12、24、

2、48、72小時(shí)。人早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株NB4細(xì)胞由浙江大學(xué)腫瘤研究所提供。實(shí)驗(yàn)共設(shè)小檗胺實(shí)驗(yàn)組、空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)以MTT法測(cè)定小檗胺對(duì)N84細(xì)胞、正常骨髓細(xì)胞的增殖抑制作用，并求得其24、48、72小時(shí)半數(shù)抑制濃度(IC。。)。形態(tài)學(xué)觀察、DNA片段分析、流式細(xì)胞儀檢測(cè)小檗胺對(duì)NB4細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用，用巢式PCR(nested—PCR)、RT—PCR和流式細(xì)胞儀(FCM)等檢測(cè)小檗胺作用NB4細(xì)胞前后融合基因PML／RA

3、Ra、Survivin基因和Caspase3的表達(dá)。結(jié)果經(jīng)不同濃度小檗胺處理NB4細(xì)胞不同時(shí)間后，細(xì)胞生長(zhǎng)出現(xiàn)明顯的抑制，并表現(xiàn)出明顯的時(shí)間劑量依賴(lài)性。當(dāng)小檗胺濃度為8ug／ml時(shí)，其抑制率從24小時(shí)的698％，增加到72小時(shí)的82，8％；作用NB4細(xì)胞48小時(shí)后，NB4細(xì)胞抑制率從4ug／m1的706％上升至8ug／ml時(shí)的825％，各組問(wèn)P值均005，提示有顯著性差異。小檗胺對(duì)NB4細(xì)胞作用24、48、72小時(shí)后的IC”分別為：72