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1、中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文亞硒酸鈉誘導(dǎo)人急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株NB4和耐藥細(xì)胞株MR2的凋亡及其機(jī)制的初步研究姓名:孫義民申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師:許彩民2001.12.1中困協(xié)和醫(yī)科人學(xué)壩卜學(xué)位論文中文摘要急性早幼粒細(xì)胞白血病( A P L ) 是急性髓系白血病( A M L ) 的一個(gè)亞型。近年來,全反式維甲酸( A T R A ) 和三氧化二砷( A s 2 0 3 ) 的應(yīng)用使大
2、部分A P L病人可達(dá)到臨床完全緩解( C R ) ,但兩者的長(zhǎng)期療效仍不能令人滿意,且有相當(dāng)程度的毒副作用。 、0 ’! 二,一 ..≮“:《沁;1衣窩驗(yàn)組的前期工作發(fā)現(xiàn),亞硒酸鈉.可以誘導(dǎo)A P L 細(xì)胞株N B 4 發(fā)生凋亡,j 1 、*有可能成為一種治療A P L 的新藥物。本斑究首先進(jìn)一步證實(shí)了亞硒酸鈉對(duì)N B 4細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制和凋亡誘導(dǎo)作用,。并初步討論了亞硒酸鈉和A T R A 聯(lián)合用藥對(duì)N B 4 細(xì)胞凋亡及分化的影響;
3、然后針對(duì)A P L 耐藥病人研究了亞硒酸鈉對(duì)A P L 抗A T R A 細(xì)胞株M R 2 的生長(zhǎng)抑制及凋亡作用;最后,以耐藥細(xì)胞株M R 2 為研究對(duì)象,采用多種實(shí)驗(yàn)方法,探討了亞硒酸鈉誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的可能機(jī)制。/一:亞硒酸鈉對(duì)N B 4 和M R 2 細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制及凋亡誘導(dǎo)作用f‘在啟動(dòng)任何一種化學(xué)藥物的基礎(chǔ)研究之前,必須首先完成其毒性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明:當(dāng)亞硒酸鈉的濃度小于5 0 um o l /L 時(shí),對(duì)正常骨髓單核細(xì)胞無明顯的毒副
4、作用。在亞硒酸鈉的安全劑量范圍內(nèi),我們進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)。通過細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線及存活率分析和M T T 實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)N B 4 和M R 2 兩種細(xì)胞株對(duì)亞硒酸鈉作用的敏感性差異較大。但1 0 um o l /L 對(duì)兩種細(xì)胞來說都是?個(gè)標(biāo)志性濃度,因?yàn)槠淠茌^快的引起顯著的生長(zhǎng)抑制作用,并且隨著藥物濃度的加大,誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng),這種抑制作用顯著增強(qiáng)。基于以上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,根掘作用時(shí)問短、凋亡明顯和壞死細(xì)胞百分率低的原則,我們確定了進(jìn)一步研究凋亡作
5、用的亞硒酸鈉濃度:N B 4 —2 0 u m o l /L ,M R 2 —4 0 um o l /L 。在亞硒酸鈉作用細(xì)胞不同時(shí)間后,我們采用了經(jīng)典的形態(tài)學(xué)鑒定、D N A 片段化的瓊脂糖凝膠電泳分析和近幾年發(fā)展起來的流式細(xì)胞術(shù)三種實(shí)驗(yàn)方法對(duì)亞硒酸鈉引起的細(xì)胞凋亡加以驗(yàn)證。結(jié)果表明:亞硒酸鈉能夠誘導(dǎo)兩種細(xì)胞株發(fā)生凋亡,表現(xiàn)為典型的凋£:形態(tài)的出現(xiàn)、“D N A L a d d e r ”的形成、亞二倍體細(xì)胞比率的增高和磷脂酰絲氬酸(
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