丹參酮ⅡA誘導急性早幼粒細胞性白血病細胞株(NB4細胞)分化機制的研究及與ATRA和As2O3的比較.pdf

1、背景
　　兒童白血病是小兒惡性腫瘤中最常見的類型。急性早幼粒細胞白血病(APL)占急性髓系白血病(AML)的10～15％。隨著全反式維甲酸(ATRA)和三氧化二砷(As2o3)應(yīng)用于臨床，APL完全緩解率可達90％以上，但ATRA和As2o3的毒副作用及耐藥性日益增多，因此，有必要在深入研究ATRA和As2o3的同時，尋找和開發(fā)毒副作用小、療效好的新的治療方法。丹參酮ⅡA(TanⅡA)是從傳統(tǒng)中藥丹參提取的主要有效成份，近年來發(fā)現(xiàn)

2、TanⅡA在細胞分化過程中具有多種作用，有可能繼ATRA和As2o3之后，成為對APL具有良好誘導分化作用，而又較少副作用的藥物。但目前對丹參酮ⅡA抗腫瘤的研究還不深入，其抗腫瘤的具體機制并不清楚。
　　目的
　　研究TanⅡA對急性早幼粒細胞白血病細胞株NB4細胞的誘導分化、抑制增殖作用機制，并與ATRA及As2o3做比較，探討TanⅡA誘導分化NB4細胞的分子生物學機制，為TanⅡA用于白血病的臨床治療提供實驗和理論依據(jù)

3、。
　　方法
　　將APL細胞株NB4細胞分為7組體外培養(yǎng)。在對數(shù)生長期分別加入不同濃度的TanⅡA、ATRA、As2o3和DMS0，觀測12h、24h、48h、72h、96h、120h細胞的各項指標。觀測NB4細胞的生長狀況、形態(tài)學改變，細胞膜表面分化抗原(CD11b和CD33)的改變，實時定量PCR法檢測PML/RARα融合基因、stat1、stat2、stat3、stat5ab基因mRNA水平的表達，Western-b

4、lot法檢測PML-RARα融合蛋白、STAT1蛋白、STAT2蛋白、STAT3蛋白、STAT5a蛋白、STAT5b蛋白，用熒光免疫組織化學技術(shù)對PML-RARα融合蛋白表達進行定位研究。
　　結(jié)果
　　1.TanⅡA、As2o3、ATRA均能抑制NB4細胞生長，誘導NB4細胞分化。TanⅡA對NB4細胞抑制生長，誘導分化的作用隨著藥物濃度的增加和作用時間的延長而逐漸增強。0.75umol/LTanⅡA為最佳濃度。
　

5、　2.TanⅡA、As2o3、ATRA均能上調(diào)NB4細胞分化抗原CD11b和下調(diào)CD33表達。0.75umol/LTanⅡA為最佳濃度。
　　3.TanⅡA、As2o3、ATRA不改變PML/RARαmRNA的表達，可降解PML/RARα融合蛋白，恢復PML蛋白的表達，TanⅡA、As2o3、ATRA能使NB4細胞PML蛋白異常分布重新定位，核小體結(jié)構(gòu)恢復。
　　4.TanⅡA和ATRA能上調(diào)Stat1和Stat2基因的表達

6、，促進STAT1和STAT2蛋白的表達。As2o3對Stat1、Stat2基因的和STAT1、STAT2蛋白的表達無影響。
　　5.TanⅡA、As2o3、ATRA不改變stat3、stat5abmRNA水平的表達，對STAT3、STAT5a、STAT5b蛋白的表達無影響。
　　結(jié)論
　　TanⅡA能抑制NB4細胞生長，誘導NB4細胞分化，作用強度呈時間和濃度依賴性。0.75umol/LTanⅡA為最佳濃度。TanⅡA