全反式維甲酸誘導(dǎo)急性早幼粒細胞白血病細胞分化為樹突狀細胞的實驗研究.pdf

1、目的：樹突狀細胞(derldritic cell，DC)是目前已知唯一能激活未致敏T細胞(naive T cell s)的抗原呈遞細胞 (antigen preserlting cells，APC)。白血病源性DC(L-DC)既帶有白血病抗原，同時又是抗原提呈細胞，來源于患者本人，不存在MHC限制，能有效地激活特異的腫瘤免疫，有可能在白血病的免疫治療中發(fā)揮重要作用。但L-DC與證常人CD14<'+>或CD34<'+>前體細胞來源的CD8

2、3<'+>的DC相比具有相對不成熟性。而DC的免疫刺激特征有賴于成熟狀態(tài)。因此，如何獲得臨床上需要的有功能的 L-DC，在白血病細胞免疫研究和臨床治療中有重要的理論和實踐意義。應(yīng)用全反式維甲酸(ATRA)治療急性早幼粒細胞白血病(APL)取得巨大成功，使APL成為治療效果較好的白血病之一，但仍無法解決微小殘留病(MRD)及復(fù)發(fā)問題。ATRA能否誘導(dǎo)APL細胞為成熟DC，作為腫瘤疫苗治療APL及解決MRD和復(fù)發(fā)問題是本實驗?zāi)康乃凇?

3、 方法：采集有特征性染色體異常：t(15；17)(q22；q21) APL初治患者骨髓單個核細胞以及應(yīng)用急性早幼粒細胞白血病HL-60細胞株分別在完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并以ATRA處理。實驗組利用ATRA+GM-CSF+IL-4因子組合分別對APL細胞和HL-60細胞進行誘導(dǎo)培養(yǎng)；對照組則用無水乙醇+GM-CSF+IL-4組合及GM-CSF+IL-4組合；所有組別于培養(yǎng)第8天加入TNF-α。加入TNF-α24或72小時后，流式細胞儀檢測D

4、C免疫表型、應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)進行上清夜IL-12水平測定，并以MTT法觀察L-DCs刺激T淋巴細胞增殖能力(MLR)及針對白血病細胞的細胞毒作用(CTL效應(yīng))。 結(jié)果：實驗組、對照組均成功獲得具有樹突狀突起的細胞，但以實驗組樹突狀突起明顯。染色體檢查證實APL-DCs仍具有急性早幼粒細胞白血病來源的遺傳學(xué)特征。流式細胞檢測結(jié)果：實驗組APL-DC，其CDla、CDld、CD83、CD80、CD86和HLA-DR等

5、表型均較對照組明顯增高(p<0.05)；而HL-60-DC，除CDla外，上述細胞表型亦均較對照組明顯增高(p<0.05)。上清液中IL-12分泌水平實驗組均較對照組明顯增高(p<0.05)。結(jié)果還發(fā)現(xiàn)實驗組APL-DCs具有明顯的刺激自體淋巴細胞增殖的能力，且刺激能力隨APL-DCs與淋巴細胞比例的增加而升高。HL-60-DCs無明顯刺激同種異體淋巴細胞增殖的能力。對靶細胞的細胞毒作用(CTL效應(yīng))實驗結(jié)果顯示，實驗組APL-DC介導(dǎo)

6、的細胞殺傷率顯著高于對照組(P<0.05)。 結(jié)論：利用ATRA組合可以成功地誘導(dǎo)急性早幼粒細胞白血病細胞為樹突狀細胞，細胞表型檢測證實為成熟DC，其介導(dǎo)的MLR及CTL效應(yīng)明顯強于非ATRA組合所誘導(dǎo)的DC。提示DC途徑有可能是ATRA治療 APL 有效的新機制，以ATRA-APL-DCs為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗有可能在解決APL的MRD等問題上發(fā)揮強大的治療作用，為APL的治療研究提供了一個新的思路和策略。HL-60細胞源性DC介導(dǎo)