他米巴羅汀對(duì)急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株NB4誘導(dǎo)分化的研究.pdf

1、目的:
　　本研究探討新型人工合成維甲酸衍生物他米巴羅汀(tamibarotene，Am80)對(duì)急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株NB4增殖、誘導(dǎo)分化及促凋亡的影響，并初步探索Am80作用機(jī)制。
　　方法:
　　Am80為實(shí)驗(yàn)組，全反式維甲酸(all trans retinoic acid，ATRA)為陽性對(duì)照組，等體積濃度乙醇為溶劑對(duì)照組，未加任何藥物為空白對(duì)照組。以瑞氏染色觀察細(xì)胞形態(tài)，CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，流式細(xì)

2、胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面分化抗原表達(dá)及細(xì)胞凋亡率，實(shí)時(shí)熒光定量(real-time PCR)檢測(cè)增殖調(diào)控因子維甲酸誘導(dǎo)基因-G(retinoid acid induced gene-G，RIG-G)表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.NB4細(xì)胞經(jīng)Am80處理后趨向成熟粒細(xì)胞分化，形態(tài)變化呈濃度依賴性。96小時(shí)內(nèi)，0.001、0.01μmol/L Am80組未觀察明顯細(xì)胞形態(tài)變化，0.1μmol/L組可見少量細(xì)胞分化，1μmol/L組可見大量

3、中、晚幼及少量分葉核細(xì)胞，10μmol/L組除可見大量分化細(xì)胞外，還可見明顯細(xì)胞碎裂;1μmol/L Am80組較1μmol/LATRA組更早出現(xiàn)細(xì)胞分化，并在同一時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞分化更明顯。
　　2.由低至高各濃度Am80組72小時(shí)增殖抑制率分別為（11.87±1.33）％、(15.90±0.94)％、(20.50±1.02)％，(26.78±1.10)％、(32.91±0.32)％，高濃度組高于低濃度組(P＜0.05)，增殖抑制率呈

4、濃度依賴性。
　　3.兩藥物組CD11b表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)均高于空白對(duì)照組。48小時(shí)Am80組與ATRA組的CD11b陽性細(xì)胞表達(dá)率分別為(75.50±0.66)％，(75.03±1.51)％，無明顯差異(P=0.616)。Am80組與ATRA組在96小時(shí)、144小時(shí)CD11b陽性細(xì)胞表達(dá)率分別為(79.35±0.77)％vs(76.34±0.73)％(P＜0.005)，(90.82±1.63)％vs（79.35±1.22）％(P=0

5、.000)，Am80組明顯高于ATRA組。
　　共培養(yǎng)48小時(shí)，兩組CD16陽性表達(dá)均＜10％;96小時(shí)與144小時(shí)，Am80組CD16陽性細(xì)胞表達(dá)分別為（27.83±1.32）％、（92.47±0.81）％，明顯高于ATRA組的（14.27±1.20）％、(27.83±1.32)％（P值均＜0.05）。
　　共培養(yǎng)144小時(shí)Am80組細(xì)胞CD13陽性表達(dá)由48小時(shí)的(40.30±1.22)％下降至（6.45±0.69）％，

6、ATRA組細(xì)胞CD13陽性表達(dá)由（28.85±1.08）％下降至（25.68±1.07）％。Am80對(duì)CD13的下調(diào)較ATRA明顯（同一時(shí)間點(diǎn)各組間CD13陽性細(xì)胞表達(dá)率比較，P值均為0.000）。
　　4.共培養(yǎng)48小時(shí)、96小時(shí)，Am80組細(xì)胞凋亡率分別為（36.51±1.33）％、（36.05±1.43）％，明顯高于ATRA組的(23.76±1.79)％、(33.32±1.08)％，相應(yīng)P值為P=0.00與P=0.03。14

7、4小時(shí)ATRA組的凋亡率（61.28±1.75）％高于Am80組的(43.32±1.44)％(P=0.00)。推測(cè)Am80可能較ATRA更早引起細(xì)胞凋亡。
　　5.real-time PCR結(jié)果顯示，Am80、ATRA組RIG-G基因表達(dá)均顯著高于空白對(duì)照組(P=0.028、0.008)，Am80與ATRA組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.353)。
　　結(jié)論:
　　1.Am80可促使NB4細(xì)胞從早期細(xì)胞形態(tài)向中晚幼及成熟粒細(xì)