MDR1、GSTπ特異性siRNA誘導(dǎo)白血病多藥耐藥細(xì)胞株凋亡及其機(jī)制的研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文MDR1、GSTπ特異性siRNA誘導(dǎo)白血病多藥耐藥細(xì)胞株凋亡及其機(jī)制的研究姓名：馮敏華申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：顧靜文20060316第二部分siRNA真核表達(dá)載體誘導(dǎo)K562／A02凋亡及其機(jī)制的研究【摘要】目的研究siRNA誘導(dǎo)K562／A02細(xì)胞凋亡及其機(jī)制的研究。方法siRNA重組質(zhì)粒pSilenceMDRl和pSilenceGSTⅡ共轉(zhuǎn)染K562／A02細(xì)胞，同時以空載體pSilencer2

2、1U6轉(zhuǎn)染K562／A02細(xì)胞(mock)作為對照，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡；MTr法檢測阿霉素的半數(shù)抑制濃度(IC50)；透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化lWesternblot檢測凋亡相關(guān)蛋白Bcl2的改變。結(jié)果流式細(xì)胞儀顯示空載體psileno眈IU6轉(zhuǎn)染組(mock)細(xì)胞凋亡率為1165406，pSilenceMDRl和pS刪STⅡ共轉(zhuǎn)染組細(xì)胞凋亡率4498t1127(P001)?？蛰d體轉(zhuǎn)染細(xì)胞后耐藥指數(shù)為23，而pSilenceMD

3、Rl、pSilenceGsT兀共轉(zhuǎn)染后耐藥指數(shù)降低為7，半數(shù)抑制濃度(IC50)值從轉(zhuǎn)染前(116：038)gmol／ml下降為(O33_004)gmol／ml(P001)。透射電鏡下，pSllenceMDRl和pSllenceGSTⅡ共轉(zhuǎn)染組細(xì)胞胞漿濃縮、線粒體出現(xiàn)腫脹空泡樣變、胞核內(nèi)染色質(zhì)濃集、染色質(zhì)形成新月體樣改變并有凋亡小體形成等典型的凋亡改變；Westernblot結(jié)果表明重組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染組發(fā)生凋亡細(xì)胞中，Bcl一2含量由O75