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1、復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文MDR1、GSTπ特異性siRNA誘導(dǎo)白血病多藥耐藥細胞株凋亡及其機制的研究姓名:馮敏華申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師:顧靜文20060316第二部分siRNA真核表達載體誘導(dǎo)K562/A02凋亡及其機制的研究【摘要】目的研究siRNA誘導(dǎo)K562/A02細胞凋亡及其機制的研究。方法siRNA重組質(zhì)粒pSilenceMDRl和pSilenceGSTⅡ共轉(zhuǎn)染K562/A02細胞,同時以空載體pSilencer2
2、1U6轉(zhuǎn)染K562/A02細胞(mock)作為對照,流式細胞儀檢測細胞凋亡;MTr法檢測阿霉素的半數(shù)抑制濃度(IC50);透射電鏡觀察細胞超微結(jié)構(gòu)變化lWesternblot檢測凋亡相關(guān)蛋白Bcl2的改變。結(jié)果流式細胞儀顯示空載體psileno眈IU6轉(zhuǎn)染組(mock)細胞凋亡率為1165406,pSilenceMDRl和pS刪STⅡ共轉(zhuǎn)染組細胞凋亡率4498t1127(P001)。空載體轉(zhuǎn)染細胞后耐藥指數(shù)為23,而pSilenceMD
3、Rl、pSilenceGsT兀共轉(zhuǎn)染后耐藥指數(shù)降低為7,半數(shù)抑制濃度(IC50)值從轉(zhuǎn)染前(116:038)gmol/ml下降為(O33_004)gmol/ml(P001)。透射電鏡下,pSllenceMDRl和pSllenceGSTⅡ共轉(zhuǎn)染組細胞胞漿濃縮、線粒體出現(xiàn)腫脹空泡樣變、胞核內(nèi)染色質(zhì)濃集、染色質(zhì)形成新月體樣改變并有凋亡小體形成等典型的凋亡改變;Westernblot結(jié)果表明重組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染組發(fā)生凋亡細胞中,Bcl一2含量由O75
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