siRNA逆轉(zhuǎn)人胃癌細(xì)胞mdr1介導(dǎo)的多藥耐藥.pdf

1、腫瘤多藥耐藥(multidrugresistance，MDR)嚴(yán)重影響化療效果和患者生存質(zhì)量，MDR分原發(fā)性多藥耐藥和獲得性多藥耐藥兩類(lèi)。多藥耐藥基因l(multidmgresistancegene1，mdrl)為最早認(rèn)識(shí)的、人類(lèi)mdt基因家族中功能十分肯定的耐藥基因，編碼分子量為170kDa的P-糖蛋白(P-GLycoprotein，P-gp)。P-gp主要分布在細(xì)胞膜上，P-gp分子上藥物結(jié)合位點(diǎn)和化療藥物結(jié)合、主動(dòng)將其泵出細(xì)胞外，

2、導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)藥物濃度減少。 本實(shí)驗(yàn)用DNA斑點(diǎn)印跡檢測(cè)mdtlDNA水平，RT-PCR和原位雜交檢測(cè)mdrlmRNA表達(dá)，用Westernblotting和免疫組化檢測(cè)P-gp表達(dá)，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)阿霉素(adriamycin，ADR)蓄積，MTT法檢測(cè)細(xì)胞對(duì)化療藥的敏感性，以人胃黏膜上皮細(xì)胞系GES-1為對(duì)照，系統(tǒng)地對(duì)比人胃腺癌細(xì)胞系BGC823、SGC7901及人胃癌MDR細(xì)胞亞系SGC7901/VCR細(xì)胞mdrl介導(dǎo)M

3、DR的狀況。設(shè)計(jì)并體外轉(zhuǎn)錄合成4條siRNA(mdrlsi326、mdrlsil513、mdrlsi2631和mdrlsi3071)，轉(zhuǎn)染SGC7901/VCR細(xì)胞，檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的mdrlDNA水平、mdtlmRNA及P-gp表達(dá)、P-gp功能和細(xì)胞對(duì)ADR的敏感性改變，判斷其對(duì)SGC7901/VCR細(xì)胞MDR的逆轉(zhuǎn)作用，并篩選高效siRNA，探索其作為藥物使用的可行性等。將SGC7901/VCR細(xì)胞接種子裸鼠皮下成瘤后，序貫腹腔注射

4、mdrlsi326和ADR，觀察siRNA對(duì)裸鼠S~INCR細(xì)胞移植瘤mdrl介導(dǎo)MDR的逆轉(zhuǎn)作用。 結(jié)論: 1．人胃癌細(xì)胞系BGC823、SGC7901和SOC7901/VCR均有mdrl介導(dǎo)的MDR，它們的MDR主要由mdrl表達(dá)增強(qiáng)所致。 2．靶向mdrl的siRNA可以逆轉(zhuǎn)SGC7901/VCR細(xì)胞mdrl介導(dǎo)的MDR，逆轉(zhuǎn)作用具有序列特異性、時(shí)間和濃度依賴(lài)性。 3.腹腔注射mdrlsi326可以