MDR1-MRP反義寡核苷酸逆轉人胃腺癌細胞SGC7901-ADM多藥耐藥的研究.pdf

1、目的：探討應用MDRl／MRP反義寡脫氧核苷酸(antisenseoligodooxynucleotide,ASODN)片段對人胃腺癌耐藥細胞SGC7901／ADM多藥耐藥的逆轉作用。 方法：人工合成互補于MDRl及MRP基因mRNA特定片段的ASODN，并合成相應的SODN片段作為對照。用陽離子脂質體Lipofectamine2000(LF)將ASODN及SODN分別轉染SGC7901／ADM細胞，采用MTT法、流式細胞術、免

2、疫細胞化學及RT-PCR,檢測SGC7901／ADM經體外轉染脫氧寡核苷酸片段(oligodooxynucleotide，ODN)后對ADM等抗癌藥的敏感性、胞內Rhl23的平均熒光強度、細胞周期的改變及MDRl、MRP在基因和蛋白水平上表達的變化。 結果： 1．MTT法和流式證實，MDRl+MRP／ASODN聯合轉染SGC7901／ADM細胞，與單獨任何～種ASODN轉染相比都能更大程度增加對阿霉素、卡鉑等化療藥物的敏

3、感性，細胞對阿霉素的IC50由轉染前的16．82ug/m1降至2．34ug/ml。 2．流式細胞儀分析兩種ASODN聯合轉染48h后，與相應的SODN對照片段作用后相比，細胞在同樣劑量化療藥物的作用下，出現更明顯的細胞周期阻滯，大量細胞被阻滯于S期,GO／G1期比例顯著下降，S期百分數升高。其中阿霉素組出現凋亡峰，聯合轉染組凋亡率明顯升高。 3．RT-PCR結果顯示，ASODN轉染SGC7901／ADMl2h后MDRlm

4、RNA、MRPmRNA的表達開始降低，24h后下降最明顯，48h恢復至轉染前水平。免疫細胞化學證實轉染ASODN48h后，SGC7901／ADM細胞P-gp、MRP的表達顯著下降。 4．Rhl23泵出率實驗發(fā)現，轉染后48h，細胞內Rhl23的潴留量顯著高于轉染前，其平均熒光強度聯合轉染組顯著高于單純轉染。 結論：轉染ASODN／LF可部分逆轉人胃腺癌耐藥細胞SGC7901／ADM多藥耐藥，聯合轉染MDRl、MRP兩種A