熱休克蛋白27和70反義寡核苷酸對(duì)食管鱗癌和胃腺癌細(xì)胞凋亡及增殖的影響.pdf

1、目的:腫瘤的發(fā)生是多因素、多步驟的過(guò)程,最突出的表現(xiàn)是腫瘤細(xì)胞的失控性增殖,與凋亡調(diào)控失常有關(guān)。熱休克蛋白(Heat shock protein,HSP)是一類(lèi)廣泛存在于生物體內(nèi)、生物進(jìn)化高度保守、在生理和應(yīng)激條件下能表達(dá)的蛋白質(zhì)家族。研究發(fā)現(xiàn),HSP在大多數(shù)腫瘤中高表達(dá),HSP主要是基于在細(xì)胞內(nèi)外的位置不同而具有雙重作用,細(xì)胞內(nèi)的HSP可通過(guò)多種機(jī)制調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞凋亡,細(xì)胞外的HSP激活特異性及非特異性抗腫瘤細(xì)胞免疫反應(yīng)。近年來(lái),HSP

2、27和HSP70與腫瘤細(xì)胞凋亡、腫瘤免疫和腫瘤患者預(yù)后的關(guān)系已成為腫瘤學(xué)研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域,但研究結(jié)論不盡相同。國(guó)內(nèi)報(bào)道食管鱗狀細(xì)胞癌組織中HSP70低表達(dá)者預(yù)后差,Nakaiima等報(bào)道HSP70在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中高表達(dá)者預(yù)后好,而賀勇等研究發(fā)現(xiàn)在喉癌組織中HSP70高表達(dá)是預(yù)后不良的標(biāo)志。HSP27在食管鱗狀細(xì)胞癌和口腔癌等鱗癌組織中,表達(dá)高者預(yù)后好,而在胃癌、乳腺癌、前列腺癌及卵巢癌等腺癌組織中,高表達(dá)者預(yù)后差。HSP27和HSP

3、70對(duì)鱗癌與腺癌的預(yù)后影響研究結(jié)果不盡一致,可能提示其對(duì)鱗癌和腺癌細(xì)胞凋亡的作用存在著差異。因此,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察HSP27和HSP70的反義寡核苷酸對(duì)體外培養(yǎng)的人食管鱗癌細(xì)胞株TE-13和胃腺癌細(xì)胞株MGC-803的增殖及凋亡的影響,以期探討HSP27和HSP70對(duì)鱗癌細(xì)胞和腺癌細(xì)胞凋亡作用的異同。
　　 方法:本研究采用體外培養(yǎng)人的食管癌細(xì)胞株TE-13和胃癌細(xì)胞株MGC-803,分別培養(yǎng)于PRMI1640培養(yǎng)基中,實(shí)驗(yàn)分為空

4、白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,實(shí)驗(yàn)組分別加入不同濃度的人工合成HSP27和HSP70的反義寡核苷酸,終濃度為5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L,以不含HSP27或HSP70反義寡核苷酸的完全培養(yǎng)基為空白對(duì)照。作用24、48、72小時(shí)后,分別應(yīng)用四甲基偶氮唑藍(lán)光吸收法(MTT)檢測(cè)兩種癌細(xì)胞株的增殖活性;作用48小時(shí)后,應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分析細(xì)胞周期及檢測(cè)兩種癌細(xì)胞株的凋亡率。
　　 結(jié)果:
　　 1.HSP27

5、和HSP70反義寡核苷酸對(duì)TE-13細(xì)胞增殖的影響
　　 與空白對(duì)照組相比,15μmol/L的HSP27或15μmol/L HSP70反義寡核苷酸處理細(xì)胞24h,5,10,15μmol/L的HSP27或15μmol/L的HSP70反義寡核苷酸處理細(xì)胞48h及72h后,明顯抑制TE-13細(xì)胞的增殖,15μmol/L的HSP27和HSP70反義寡核苷酸處理細(xì)胞24h的抑制率分別為13.68％和10.02％,48h的抑制率分別為29.

6、16％和20.84％,72h的抑制率分別為15.24％和22.46％,HSP70反義寡核苷酸對(duì)TE-13細(xì)胞的抑制作用呈時(shí)間和劑量依賴(lài)性。而HSP27反義寡核苷酸的作用無(wú)時(shí)間和劑量依賴(lài)性。
　　 2.HSP27和HSP70反義寡核苷酸對(duì)MGC-803細(xì)胞增殖的影響
　　 與空白對(duì)照組相比,5,10,15μmol/L的HSP27或HSP70反義寡核苷酸處理細(xì)胞24h,15μmol/L的HSP27反義寡核苷酸或5,10,15

7、μmol/L的HSP70反義寡核苷酸處理細(xì)胞48h及10,15μmol/L的HSP27反義寡核苷酸或5,10,15μmol/L的HSP70反義寡核苷酸處理細(xì)胞72h后,明顯抑制MGC-803細(xì)胞的增殖,15μmol/L的HSP27或HSP70反義寡核苷酸處理細(xì)胞24h的抑制率分別為16％和17.15％,48h的抑制率分別為27.09％和21.26％,72h的抑制率分別為23.16％和23.55％,HSP27反義寡核苷酸對(duì)MGC-803細(xì)

8、胞的抑制作用呈劑量依賴(lài)性,無(wú)時(shí)間依賴(lài)性。而HSP70反義寡核苷酸的作用呈時(shí)間依賴(lài)性,而無(wú)劑量依賴(lài)性。
　　 3.HSP27和HSP70反義寡核苷酸對(duì)TE-13細(xì)胞周期的影響
　　 5,10和15μmol/L的HSP27和HSP70反義寡核苷酸處理細(xì)胞48h后,TE-13細(xì)胞的細(xì)胞周期時(shí)相分布發(fā)生了改變。與空白對(duì)照組比較,不同濃度的HSP27和HSP70反義寡核苷酸對(duì)G0/G1期和G2/M期細(xì)胞均無(wú)顯著性影響,但10和15

9、μmol/L的HSP27和HSP70反義寡核苷酸均使S期細(xì)胞數(shù)增加。上述結(jié)果顯示,10,15μmol/L的HSP27和HSP70反義寡核苷酸阻滯TE-13細(xì)胞于S期,二者可能通過(guò)改變細(xì)胞的周期時(shí)相分布,抑制了細(xì)胞的增殖。
　　 4.HSP27和HSP70反義寡核苷酸對(duì)MGC-803細(xì)胞周期的影響
　　 5,10和15μmol/L的HSP27和HSP70反義寡核苷酸處理MGC-803細(xì)胞48h后,亦對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期時(shí)相

10、分布產(chǎn)生影響。與對(duì)照組比較,15μmol/L的HSP27和HSP70反義寡核苷酸處理組均表現(xiàn)為G0/G1期細(xì)胞無(wú)顯著性差異,S期細(xì)胞增加,G2/M期細(xì)胞減少。由此可見(jiàn),HSP27和HSP70反義寡核苷酸對(duì)MGC-803細(xì)胞的抑制作用可能是通過(guò)阻滯細(xì)胞于S期,從而抑制了細(xì)胞的增殖。
　　 5.HSP27和HSP70反義寡核苷酸對(duì)TE-13細(xì)胞和MGC-803細(xì)胞凋亡率的影響
　　 FCM檢測(cè)結(jié)果顯示,5,10和15μmol

11、/L HSP27或HSP70反義寡核苷酸處理TE-13細(xì)胞48h,處理組的凋亡率明顯高于對(duì)照組。5μmol/LHSP27或HSP70反義寡核苷酸處理 TE-13細(xì)胞48h的凋亡率分別為(8.56±2.95)％和(12.76±0.49)％,10μmol/L的凋亡率分別為(11.01±2.46)％和(11.38±2.18)％,15μmol/L的凋亡率分別為(10.52±1.86)％和(13.21±1.67)％。FCM檢測(cè)MGC-803細(xì)胞凋

12、亡率結(jié)果未發(fā)現(xiàn)有意義的凋亡峰,未予統(tǒng)計(jì)。
　　 結(jié)論:
　　 1.HSP27和HSP70反義寡核苷酸可以抑制體外培養(yǎng)的食管鱗癌細(xì)胞株TE-13的增殖,HSP70反義寡核苷酸對(duì)TE-13細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用呈時(shí)間和劑量依賴(lài)性。而HSP27反義寡核苷酸無(wú)時(shí)間和劑量依賴(lài)性。2.HSP27和HSP70反義寡核苷酸可以抑制體外培養(yǎng)的胃腺癌細(xì)胞株MGC-803的增殖。HSP27反義寡核苷酸對(duì)MGC-803細(xì)胞的抑制作用呈劑量依賴(lài)性,無(wú)