靶向hTERT反義寡核苷酸對(duì)人舌鱗癌細(xì)胞增殖和端粒酶的抑制作用.pdf

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文靶向hTERT反義寡核苷酸對(duì)人舌鱗癌細(xì)胞增殖和端粒酶的抑制作用姓名：姚華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：吳求亮王慧明20050501浙江大學(xué)博士學(xué)位論文近年來(lái)大量研究發(fā)現(xiàn)端粒酶是人體內(nèi)最具腫瘤特異性和高表達(dá)的生物學(xué)標(biāo)志，85％以上的惡性腫瘤有端粒酶活性而正常體細(xì)胞幾乎未見(jiàn)其表達(dá)。它是由端粒酶RNA、端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(humantelomeraseFeve[setranscriptase，hTERT)基因和

2、端粒酶相關(guān)蛋白構(gòu)成的復(fù)合體，以自身RNA為模板逆轉(zhuǎn)錄合成端粒重復(fù)序列(TTAGGG)n，維持端粒長(zhǎng)度。深入研究發(fā)現(xiàn)，hTERT與端粒酶活性平行，并決定端粒酶活性，是端粒酶激活的限速步驟。90％以上惡性腫瘤有hTERT轉(zhuǎn)錄，hTERT比端粒酶RNA與惡性腫瘤更具相關(guān)性。用反義hl’ERT導(dǎo)入肝癌細(xì)胞。白血病細(xì)胞等癌細(xì)胞后具有明顯抑制生長(zhǎng)及誘導(dǎo)凋亡作用；將高表達(dá)hTERT癌細(xì)胞敲除hTERTmRNA后，細(xì)胞惡性表型出現(xiàn)逆轉(zhuǎn)；正常細(xì)胞導(dǎo)入hT

3、ERT后，細(xì)胞永生化，經(jīng)分裂數(shù)代后出現(xiàn)惡性生物學(xué)行為。這些證據(jù)表明，hTERT與癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，hTERT已成為抗癌治療的靶點(diǎn)。而國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)，尚未見(jiàn)有以hTERT為靶點(diǎn)抑制舌鱗癌的系統(tǒng)報(bào)道。本研究通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量法檢測(cè)口腔鱗癌組織中hTERTmRNA的表達(dá)情況，探討hTERT在口腔中表達(dá)的意義。以端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因作為分子靶點(diǎn)，設(shè)計(jì)一段與之互補(bǔ)的反義寡核苷酸序列，采用具有轉(zhuǎn)染率高、毒性低的陽(yáng)離子脂質(zhì)體作介導(dǎo)，將hTERT反義寡核苷

4、酸導(dǎo)入口腔鱗癌Tca8113細(xì)胞，探討其對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞周期和端粒酶活性的影響及機(jī)理。將經(jīng)過(guò)hTERT反義寡核苷酸預(yù)處理的Tca8113細(xì)胞接種于裸鼠，觀察lca8I】3細(xì)胞裸鼠移植瘤成瘤時(shí)間、瘤重和端粒酶變化，了解hTERT反義寡核苷酸在體內(nèi)環(huán)境下對(duì)Tca8Il3細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。通過(guò)上述系統(tǒng)研究，探討以hTERT為靶點(diǎn)開(kāi)展抗舌癌研究的可行性，為深入研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。材料與方法1研究對(duì)象；新鮮口腔鱗癌及其手術(shù)切緣組織、正常口