Paxillin反義寡核苷酸對食管癌EC9706細胞中paxillin表達抑制作用.pdf

1、食管癌是常見的惡性腫瘤之一，中國是世界上食管癌高發(fā)國家、也是世界上食管癌高死亡率的國家之一，河南省是食管癌的高發(fā)省份。目前的治療方法對中、晚期食管癌而言，療效均不太滿意，并有一定的局限性，因此尋找新的更有效的治療食管癌的方法，已成為近年來的研究熱點之一。
　　 樁蛋白(paxillin)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種重要的細胞黏附因子，是致瘤性酪氨酸激酶的一種底物，與整合素相關聯(lián)，構成細胞與細胞外基質局部黏附關鍵部位，調節(jié)細胞的移動和播散等

2、功能，從而提高腫瘤細胞轉移和侵襲的能力。Paxillin作為一種信號接頭蛋白，在多種細胞外刺激引起的信號傳導中發(fā)揮作用。研究表明paxillin有參與動態(tài)調節(jié)黏著斑、調節(jié)細胞的移動和播散等功能。而腫瘤的浸潤和轉移與細胞的黏附力、移動力的改變直接相關，提示paxillin在腫瘤細胞的浸潤和轉移中起著十分重要的作用。
　　 反義寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides，ASODN)可特異性的抑制靶基因

3、的表達，而不影響其他基因的正常功能，近年來已廣泛用于基因研究，但在食管癌EC9706細胞中，利用ASODN抑制paxillin產生影響的研究，目前尚未見文獻報道。
　　 本研究采用ASODN技術，觀察不同濃度的paxillin ASODN處理食管癌EC9706細胞不同時間后，對食管癌細胞paxillin的表達抑制情況。將paxillinASODN轉染的最佳作用時間和最佳作用濃度的EC9706細胞接種于裸小鼠皮下，構建裸鼠移植瘤模

4、型，觀察各組裸鼠成瘤情況及構建的裸鼠移植瘤組織中paxillin的表達情況，為食管癌的臨床靶向治療提供實驗依據(jù)。
　　 材料和方法
　　 1.人食管癌EC9706細胞系由中國醫(yī)學科學院腫瘤研究所贈送。
　　 2.EC9706細胞分組培養(yǎng)：將對數(shù)生長的細胞按實驗設計分為不同終濃度、不同作用時間的ASODN實驗組、無關序列組(N-ODN)和空白對照組進行實驗分組，每組設3個復孔進行培養(yǎng)。
　　 3.利用Lip

5、ofecter脂質體介導，轉染paxillin ASODN和N-ODN于食管癌EC9706細胞中。
　　 4.SPF級BALB/C裸小鼠15只，飼養(yǎng)在恒濕、恒溫的裸鼠隔離器中，飼料及飲水均經滅菌處理。
　　 5.裸鼠移植瘤模型的構建：將ASODN實驗組、N-ODN組和空白對照組細胞分別注入裸鼠左下肢皮內，在恒濕、恒溫的隔離器中飼養(yǎng)。
　　 6.采用免疫組化PV法檢測各實驗組細胞和移植瘤組織中Paxillin蛋白的

6、表達。
　　 7.采用原位雜交技術檢測各實驗組細胞和移植瘤組織中paxillin mRNA的表達。
　　 8.統(tǒng)計學處理：統(tǒng)計分析采用SPSS10.0軟件。計量資料用均數(shù)±標準差(X±s)表示，兩組均數(shù)的比較用t檢驗，兩組以上均數(shù)的比較用單因素方差分析；檢驗水準α=0.05。
　　 結果
　　 1.免疫細胞化學顯示，轉染paxillin ASODN的EC9706細胞隨濃度或時間的增加，Paxillin蛋白

7、的表達降低：在同一時間不同濃度和同一濃度不同時間差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，濃度為12μmol/L paxillin ASODN作用72h效應最強。
　　 2.原位雜交結果顯示，轉染paxillin ASODN的EC9706細胞隨濃度或時間的增加paxillin mRNA表達降低，在同一時間不同濃度和同一濃度不同時間差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，濃度為12μmol/L paxillin ASODN作用72h效應最強

8、。
　　 3.免疫組織化學顯示，實驗組裸鼠移植瘤組織中Paxillin蛋白的表達降低，與無關序列組和空白對照組相比，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 4.原位雜交結果顯示，實驗組裸鼠移植瘤組織中paxillin mRNA的表達降低，分別與N-ODN組和空白對照組相比，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 結論
　　 1.paxillin ASODN轉染后，EC9706細胞中Paxillin