siRNA沉默食管癌EC9706細(xì)胞中Livin表達(dá)的生物學(xué)效應(yīng)初步分析.pdf_第1頁
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1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文siRNA沉默食管癌EC9706細(xì)胞中Livin表達(dá)的生物學(xué)效應(yīng)初步分析姓名：郭斌申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：陳宗德趙國強(qiáng)20070326鄭州大學(xué)2007屆碩士學(xué)位論文中文摘要和ClaI雙酶切siRNA表達(dá)載體pSUPERneo；將雙粘livina和livinl3發(fā)卡樣siRNA片段分別連接入siRNA表達(dá)載體pSUPERneo中；利用BamHI和ClaI雙酶切篩選鑒定重組子，并對重組子命名pSUPERn

2、eoSlil、pSUPERneoSli2和pSUPERncoC：對插入序列進(jìn)行DNA序列分析。用脂質(zhì)體包裹分別轉(zhuǎn)染沉默Livin表達(dá)的siRNA載體以及l(fā)ivina和livinlB表達(dá)載體入食管癌細(xì)胞EC9706。熒光定量RTPCR檢測LivinmRNA表達(dá)情況，測定細(xì)胞生長曲線和Caspase3活性，檢測細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果1通過篩選并通過同源序列檢索和進(jìn)一步優(yōu)選，最后確定19個堿基為siRNA靶片咧：GcGTcTGGc(x℃crI℃

3、TAT(44m458)和GTcIGGccTc(HTcTATGA(442460)。2siRNA發(fā)卡DNA的退火后，電泳可見明亮條帶，均位于約60bp處，與設(shè)計完全一致。3用BamHI和ClaI雙酶切對重組質(zhì)粒進(jìn)行鑒定，得到pSUPERneoSlil、pSUPERneo—Sli2和pSUPERneo—C。4對重組子pSUPERneo—Slil、pSUPERneoSli2ffllpSUPER—neo—C插入片段DNA序列測序，結(jié)果與設(shè)計完全一

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