調(diào)控食管癌EC9706細胞DNA polβ表達的初步研究.pdf

1、鄭州大學碩士學位論文調(diào)控食管癌EC9706細胞DNApolβ表達的初步研究姓名：王濤申請學位級別：碩士專業(yè)：病理學與病理生理學指導教師：董子明趙國強20070501鄭州大學2007屆碩卜畢業(yè)論文摘要生物學特性有何影響的研究報道尚不多。RNAi技術(shù)的出現(xiàn)就為探求這一問題提供了一個新的方法。RNA干擾(RNAinterference，RNAi)是一種由雙鏈RNA(doublestrandsRNA，dsRNA)引起的保守的生物學反應，dsRN

2、A經(jīng)過RNA酶III核酸酶(Dicer)處理后，降解成2卜23個堿基的siRNA(smallinterferingRNA)。siRNA與RNA誘導沉默復合物(RNA—inducedsilencingcomplex，RISC)結(jié)合后，siRNA解鏈，反義鏈引導RNA誘導沉默復合物與同源mRNA結(jié)合，從而切割mRNA，使之喪失轉(zhuǎn)錄信息，達到特異性抑制目的基因表達的效果。研究目的本實驗通過構(gòu)建DNApolB靶向的siRNA表達載體，將siRN

3、A表達載體和野生型pol6轉(zhuǎn)染至食管癌EC9706細胞，調(diào)控polp的表達狀態(tài)。對食管癌EC9706細胞在DNApo]B不同表達水平下的生物學特性進行了探討。旨在揭示DNApolB基因在細胞內(nèi)的適宜表達和功能狀態(tài)，為食管癌的干預防治提供新的思路及治療的靶點。研究方法根據(jù)GenBank報道的DNA聚合酶6的核苷酸序列(M13140)，參照siRNA的設計策略，選取了RNAi的位點，設計合成針對其編碼區(qū)的DNA寡核苷酸單鏈，退火后形成雙鏈。

4、與攜帶hU6啟動子的pSINsi—hU6質(zhì)粒構(gòu)建針對DNA聚合酶B的siRNA表達載體。在陽離子脂質(zhì)體的介導下，將siRNA表達載體和野生型polB轉(zhuǎn)染至食管癌EC9706細胞株。實驗分為五組，分別為轉(zhuǎn)染siRNA表達載體的實驗組1和實驗組2、轉(zhuǎn)染野生型pol6的pol8高表達組、轉(zhuǎn)染空載體pSINsi—hU6的空載體組和未轉(zhuǎn)染的空白對照組，G418篩選陽性克隆后建立穩(wěn)定表達的細胞系。通過流式細胞術(shù)觀察DNApolB不同表達水平下食管癌