siRNA對人食管癌EC9706細胞中eIF4E、4EBP1表達影響的研究.pdf

1、授予單位代碼10459學號或申請?zhí)枴唤z且塑頤四里衛(wèi)如立密級公開文學論大位州學鄭士碩(科學學位)siRNA對人食管癌EC97O6細胞中eIF4E、4EBPI表達影響的研究院系名稱:基礎醫(yī)學院學科門類:醫(yī)學專業(yè)名稱:病理學與病理生理學作者姓名:周強導師姓名、職稱:陳奎生教授張紅教授二零零九年五月鄭州大學21洲拍屆碩士研究生畢業(yè)論文siRNA對人食管癌EC，7偽細胞中。IF4E、礴EB，l表達影響的研究的4EBPI與eIF4E結合，形成eIF

2、4E一4EBPI復合體，從而阻止了帽依賴性翻譯的起始而當4EBPI發(fā)生磷酸化后，eIF4E與4EBPI分離，從而解除對翻譯的抑制作用，啟動蛋白質的翻譯過程。另有研究表明，使用RNA干擾技術抑制乳腺癌細胞系中eIF4E表達的同時可降低4EBPI的表達量。有關在食管癌中使用RNAi技術抑制eIF4E、4EBPI表達的研究迄今尚未見文獻報道。RNA干擾(RNAinterferenee，RNAi)是一種在動植物中廣泛存在的通過雙鏈RNA(dou

3、bleStrRNA，dsRNA)在mRNA水平上誘導特異性序列基因沉默的過程。dsRNA進入細胞后，在dSRNA核酸酶(Dicer)作用下，被裂解成Zlbp一23bp的小干擾RNA(smal1interferingRNA，siRNA)，SIRNA與一種多聚核酸酶復合物結合形成RNA誘導的沉默復合體(RNA一1ndueedsileneeeomplex，RISC)，RISC同與siRNA互補的mRNA結合，發(fā)揮RNA酶作用酶切mRNA，屬于

4、轉錄后基因沉默(p。st一trans。riptionalgeneSilencing，PTGS)的一種。目前應用RNAi技術在細胞信號傳導通路、抗病毒、抗腫瘤等領域的實驗研究不斷開展，標志著RNAi將成為研究基因功能不可或缺的工具。本研究應用RNAi技術特異性抑制食管癌EC9706細胞中eIF4E表達，采用免疫細胞化學、原位雜交等技術檢測轉染前后EC9706細胞中eIF4E、4EBPI蛋白及mRNA的表達情況，應用流式細胞技術檢測轉染前后

5、細胞周期的變化情況，為臨床應用RNAi技術靶向治療食管癌提供理論依據(jù)。材料和方法1.人食管癌EC9706細胞株由中國醫(yī)學科學院腫瘤研究所分子腫瘤學國家重點實驗室惠贈。2.食管癌EC9706細胞的培養(yǎng):食管癌EC9706細胞于RPMI一1640培養(yǎng)液(含10%胎牛血清，青霉素100Uml，鏈霉素100Uml)，37℃、5%COZ孵箱內(nèi)貼壁培養(yǎng)。3.siRNA的體外合成、鑒定及篩選:首先設計合成siRNA的寡核昔酸模板，5’端為’r7啟動子