siRNA對(duì)人食管癌EC9706細(xì)胞中eIF4E、4EBP1表達(dá)影響的研究.pdf

1、授予單位代碼10459學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)枴唤z且塑頤四里衛(wèi)如立密級(jí)公開文學(xué)論大位州學(xué)鄭士碩(科學(xué)學(xué)位)siRNA對(duì)人食管癌EC97O6細(xì)胞中eIF4E、4EBPI表達(dá)影響的研究院系名稱:基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院學(xué)科門類:醫(yī)學(xué)專業(yè)名稱:病理學(xué)與病理生理學(xué)作者姓名:周強(qiáng)導(dǎo)師姓名、職稱:陳奎生教授張紅教授二零零九年五月鄭州大學(xué)21洲拍屆碩士研究生畢業(yè)論文siRNA對(duì)人食管癌EC，7偽細(xì)胞中。IF4E、礴EB，l表達(dá)影響的研究的4EBPI與eIF4E結(jié)合，形成eIF

2、4E一4EBPI復(fù)合體，從而阻止了帽依賴性翻譯的起始而當(dāng)4EBPI發(fā)生磷酸化后，eIF4E與4EBPI分離，從而解除對(duì)翻譯的抑制作用，啟動(dòng)蛋白質(zhì)的翻譯過程。另有研究表明，使用RNA干擾技術(shù)抑制乳腺癌細(xì)胞系中eIF4E表達(dá)的同時(shí)可降低4EBPI的表達(dá)量。有關(guān)在食管癌中使用RNAi技術(shù)抑制eIF4E、4EBPI表達(dá)的研究迄今尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。RNA干擾(RNAinterferenee，RNAi)是一種在動(dòng)植物中廣泛存在的通過雙鏈RNA(dou

3、bleStrRNA，dsRNA)在mRNA水平上誘導(dǎo)特異性序列基因沉默的過程。dsRNA進(jìn)入細(xì)胞后，在dSRNA核酸酶(Dicer)作用下，被裂解成Zlbp一23bp的小干擾RNA(smal1interferingRNA，siRNA)，SIRNA與一種多聚核酸酶復(fù)合物結(jié)合形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體(RNA一1ndueedsileneeeomplex，RISC)，RISC同與siRNA互補(bǔ)的mRNA結(jié)合，發(fā)揮RNA酶作用酶切mRNA，屬于

4、轉(zhuǎn)錄后基因沉默(p。st一trans。riptionalgeneSilencing，PTGS)的一種。目前應(yīng)用RNAi技術(shù)在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路、抗病毒、抗腫瘤等領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)研究不斷開展，標(biāo)志著RNAi將成為研究基因功能不可或缺的工具。本研究應(yīng)用RNAi技術(shù)特異性抑制食管癌EC9706細(xì)胞中eIF4E表達(dá)，采用免疫細(xì)胞化學(xué)、原位雜交等技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后EC9706細(xì)胞中eIF4E、4EBPI蛋白及mRNA的表達(dá)情況，應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后

5、細(xì)胞周期的變化情況，為臨床應(yīng)用RNAi技術(shù)靶向治療食管癌提供理論依據(jù)。材料和方法1.人食管癌EC9706細(xì)胞株由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所分子腫瘤學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室惠贈(zèng)。2.食管癌EC9706細(xì)胞的培養(yǎng):食管癌EC9706細(xì)胞于RPMI一1640培養(yǎng)液(含10%胎牛血清，青霉素100Uml，鏈霉素100Uml)，37℃、5%COZ孵箱內(nèi)貼壁培養(yǎng)。3.siRNA的體外合成、鑒定及篩選:首先設(shè)計(jì)合成siRNA的寡核昔酸模板，5’端為’r7啟動(dòng)子