食管鱗癌中熱休克蛋白70的表達及意義.pdf

1、食管癌是廣泛分布于世界各地的全球性疾病，其發(fā)病率有明顯的地區(qū)性差異，中國是世界的食管癌高發(fā)區(qū)；盡管食管癌的診療水平有了明顯的提高，但它的遠期生存率的改善仍非常緩慢，徹底治愈的希望依然寄托在患者被確診為癌癥時疾病所處的臨床分期。盡管腫瘤浸潤深度、腫瘤病理分級和淋巴結轉(zhuǎn)移是食管癌預后的主要影響因素，但在臨床實踐中可觀察到，在部分食管癌手術后長期生存的患者中也有侵透食管纖維膜甚至侵及周圍軟組織、低分化癌和淋巴結轉(zhuǎn)移的患者，相反，在部分生存期短

2、的患者中也有腫瘤不大、高分化癌和無淋巴結轉(zhuǎn)移的患者，因此要想對食管癌預后做出更準確的判斷，仍需寄希望于基因水平的進一步研究。 熱休克蛋白(heat shock protein，HSP)是一個廣泛存在卻又高度保守的多肽類蛋白質(zhì)家族，按其分子量大小可分為HSP27,HSP60,HSP70，HSP90等。其主要功能是作為分子伴侶維護細胞生命活動必需的蛋白質(zhì)的穩(wěn)定，具有“看家”和細胞保護功能以及重要的調(diào)節(jié)作用。近年來，HSP與臨床疾病特

3、別是與腫瘤的關系日益受到重視，HSP與腫瘤細胞凋亡、腫瘤免疫和腫瘤患者預后的關系已成為腫瘤學、免疫學研究的熱點領域。其中HSP70與腫瘤預后的關系較為密切，目前研究表明HSP70在胃癌、乳腺癌和前列腺癌等患者體內(nèi)高表達與腫瘤浸潤、淋巴結轉(zhuǎn)移有關，是預后不良的標志。但有關HSP70在食管癌組織中表達和預后意義的研究很少，而且其研究結果不一致，HSP70影響食管癌預后的機制尚不清楚。在食管癌中，鱗癌是最主要組織學類型，約占95％左右。因此，

4、我們就HSP70與食管鱗癌的關系進行了一系列研究。 第一部分，目的：探討HSP70與食管鱗癌預后的關系。 方法：收集臨床病理資料基本匹配的100例臨床資料和石蠟包埋腫瘤組織，用免疫組化方法研究其HSP70的表達情況。 結果：100例食管鱗癌組織中，90例HSP70蛋白呈陽性表達，陽性率為90％，而在15例正常粘膜中，只有2例HSP70蛋白呈弱陽性表達，陽性率為13.3％，而且僅局限于上皮基底層細胞，二者之間HSP

5、70的表達水平差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，食管鱗癌組織中HSP70蛋白的表達水平比正常食管粘膜明顯升高，提示HSP70可能參與了食管鱗癌的發(fā)生。在50例不伴有淋巴結轉(zhuǎn)移的食管鱗癌病例中，有48例(96％)表達HSP70，而在50例伴有淋巴結轉(zhuǎn)移的病人中，HSP70的表達陽性例數(shù)為42例(84％)，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，提示HSP70的表達與淋巴結轉(zhuǎn)移有關。在48例術后生存期<3年的食管鱗癌病例中，有40例(83.3

6、％)表達HSP70，而在52例生存期>5年的病人中，HSP70的表達陽性例數(shù)為50例(96.1％)，陽性率差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。HSP70蛋白的表達與預后有關，HSP70高表達者預后好。 結論：HSP70可以作為判斷食管鱗狀細胞癌預后的重要生物指標之一。 第二部分，目的：探討食管鱗癌及正常食管黏膜組織中熱休克蛋白70(HSP70)的表達狀況及其意義。 方法：收集食管鱗癌組織33例，手術切除后立即于無菌

7、狀態(tài)下切取約0.5cm X 0.5cm X 0.8cm大小食管鱗癌組織及遠切端正常食管粘膜組織，液氮速凍。提取新鮮組織中的蛋白質(zhì)并定量后，行SDS變性聚丙烯酞胺凝膠電泳，westernblotting檢測HSP70基因蛋白的表達；提取新鮮組織中的總RNA，采用半定量RT-PCR方法檢測HSP70基因Mrna的表達，以管家基因β-actin作為內(nèi)對照。應用Image Tool 3.0圖象分析軟件對檢測結果進行定量分析。分析HSP70基因蛋

8、白表達與食管鱗癌臨床病理學參數(shù)的關系。 結果：在食管鱗癌中HSP70 Mrna和蛋白陽性表達率分別為100％和93.9％，與食管正常粘膜相比明顯升高(分別為69.7％和45.5％)；食管鱗癌組織和正常食管粘膜中的HSP70 Mrna的相對表達量分別為1.35±0.21和0.73±0.19，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)：HSP70基因蛋白表達與食管鱗癌淋巴結轉(zhuǎn)移相關，與年齡、性別和浸潤深度無關。 結論：食管鱗癌組織中

9、HSP70基因表達水平明顯升高，且于淋巴結轉(zhuǎn)移相關，HSP70基因可能參與了食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展過程。 第三部分，目的：觀察熱休克蛋白70(HSP70)反義寡核苷酸阻斷食管鱗癌細胞Eca-109 HSP70 的表達及其對食管鱗癌細胞增殖、凋亡和浸潤能力的影響。 方法：分別應用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)和 Western blotting 技術檢測HSP70反義寡核苷酸(10 u mol/L)轉(zhuǎn)染食管鱗癌細胞Eca

10、-109后，HSP70基因Mrna和蛋白表達的變化；通過繪制細胞生長曲線觀察HSP70反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染對腫瘤細胞的生長抑制效應；利用流式細胞術分析轉(zhuǎn)染后細胞凋亡率和細胞周期分布的改變；應用Transwell小室觀察轉(zhuǎn)染后細胞浸潤能力的變化。 結果：HSP70 反義寡核苷酸阻斷了Eca-109細胞HSP70 Mrna和蛋白的表達；Eca-109 細胞增殖受到明顯抑制，在轉(zhuǎn)染后48h和72h，生長抑制率分別為25.5％和35.4％；