谷氨酰胺誘導(dǎo)小鼠熱休克蛋白70表達(dá)的研究.pdf

1、谷氨酰胺(Gln)是動物血液中最豐富的游離氨基酸之一，近年來越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，Gln除了在維持機(jī)體酸堿平衡、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫機(jī)能以及為組織和細(xì)胞的物質(zhì)和能量代謝提供原料等方面都具有重要作用外，還可以誘導(dǎo)細(xì)胞熱休克蛋白70(Hsp70)的表達(dá)。本試驗(yàn)通過給小鼠注射Gln和在胚胎培養(yǎng)液中添加Gln，運(yùn)用RT-PCR和WesternBlot方法檢測小鼠肝臟、子宮、卵巢和早期胚胎中Hsp70表達(dá)的變化，研究體內(nèi)外Gln誘導(dǎo)Hsp70表達(dá)的作用。<

2、br>　　 試驗(yàn)方法:
　　 1.選取8w健康雌性昆明小鼠32只隨機(jī)分成4組，Ⅰ組為對照組，尾靜脈注射生理鹽水，試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組分別尾靜脈注射Gln0.15g·kg-1、0.45g·kg-1、0.75g·kg-1，注射后4h處死，取肝臟、子宮和卵巢，采用RT-PCR和WesternBlot法分別檢測Hsp70mRNA和Hsp70蛋白表達(dá)量。
　　 2.小鼠胚胎在37℃、5％CO2條件下，在CZB培養(yǎng)液中體外培養(yǎng)至四細(xì)胞

3、，然后轉(zhuǎn)入含有葡萄糖的CZB培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)，轉(zhuǎn)液時(shí)進(jìn)行分組，Ⅰ組為對照組，使用正常葡萄糖-CZB培養(yǎng)液培養(yǎng)，Gln濃度為1mmol·L-1，試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組分別使用Gln濃度為2mmol·L-1、6mmol·L-1和10mmol·L-1的葡萄糖-CZB培養(yǎng)液培養(yǎng)。注射hCG113h后計(jì)算囊胚發(fā)育率，161h后計(jì)算囊胚孵出率，并且采用WesternBlot法檢測各組中囊胚Hsp70蛋白表達(dá)量。
　　 試驗(yàn)結(jié)果:
　　 1

4、.小鼠注射Gln后4h，試驗(yàn)組Hsp70mRNA和Hsp70蛋白表達(dá)量均高于對照組，且表達(dá)量隨著Gln注射量的增加而增加。Ⅱ組肝臟、子宮和卵巢組織中Hsp70mRNA比對照組分別增加31.82％、40.00％、41.18％，Hsp70蛋白表達(dá)量比對照組分別增加9.49％、5.49％、4.84％，兩者與對照組比較差異不顯著(P＞0.05);Ⅲ組肝臟、子宮和卵巢組織中Hsp70mRNA和Hsp70蛋白表達(dá)量比對照組分別增加72.73％、95

5、.00％、135.29％和23.56％、21.10％、14.30％，都顯著高于對照組(P＜0.05);Ⅳ組肝臟、子宮和卵巢組織中Hsp70mRNA和Hsp70蛋白表達(dá)量比對照組分別增加140.91％、160.00％、247.06％和35.33％、33.94％、33.77％，其中除肝臟Hsp70蛋白表達(dá)量顯著高于對照組(P＜0.05)外，其余均極顯著高于對照組(P＜0.01)。
　　 2.小鼠注射hCG161h后，小鼠囊胚孵出率在

6、對照組為61.88％，試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組分別為64.22％、73.21％和76.41％，Ⅱ組與對照組比較差異不顯著(P＞0.05)，Ⅲ組和Ⅳ組都顯著高于對照組(P＜0.05);對于胚胎Hsp70蛋白表達(dá)量，Ⅱ組比Ⅰ組增加0.37％，差異不顯著(P＞0.05)，Ⅲ組和Ⅳ組分別比Ⅰ組增加9.13％和16.42％，顯著高于Ⅰ組(P＜0.05)，另外，Ⅳ組比Ⅲ組多6.68％，差異顯著(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 Gln能