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文檔簡介
1、目的:
探討谷氨酰胺(glutamine,Gln)誘導(dǎo)熱休克蛋白70高表達(dá)對鹽酸異丙基腎上腺素(isoprenalinehydrochloride,ISOprenaline)所致的大鼠心房纖維化及縫隙連接蛋白43(connexin43,Cx43)重構(gòu)的影響及其機(jī)制。并與纈沙坦(valsartan)在抑制大鼠心房纖維化和縫隙連接蛋白43(Cx43)重構(gòu)中的作用進(jìn)行比較,評價(jià)谷氨酰胺的應(yīng)用價(jià)值。
方法:
該實(shí)驗(yàn)
2、共分為兩部分,具體實(shí)驗(yàn)方法如下:
第一部分實(shí)驗(yàn)方法:40只SPF級雄性SD大鼠,體質(zhì)量(180±20)g,按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)等分為對照組、二甲基亞砜(DMSO)組(DMSO組)、鹽酸異丙腎上腺素(isoprenaline,ISO)5mg?kg-1?d-1組(模型組)、ISO5mg?kg-1?d-1+丙氨酰谷氨酰胺(Ala-Gln)0.75mg?kg-1?d-1組(干預(yù)組)和ISO5mg?kg-1?d-1+槲皮素(quercet
3、in,QUE)100mg?kg-1?d-1+Ala-Gln0.75mg?kg-1?d-1+DMSO組(QUE組),每組8只大鼠。每組每天1次給予相應(yīng)試劑,7d后處死大鼠。放射免疫法檢測大鼠心房肌組織中血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)含量;蘇木素伊紅(HE)染色法觀察大鼠心房纖維化情況;Masson染色法計(jì)算心房肌膠原容積分?jǐn)?shù);免疫組織化學(xué)SP法觀察并半定量測定大鼠心房肌組織中熱休克蛋白70(heatshockprotein70,Hsp70)、磷
4、酸化c-Jun氨基末端激酶1/2/3(p-JNK1/2/3)、c-Jun及Cx43的含量。
第二部分實(shí)驗(yàn)方法:將SD雄性大鼠(160±20g)32只隨機(jī)等分為對照組(A組)、鹽酸異丙腎上腺素(ISO)[5mg/(kg?d)]組(B組)、ISO[5mg/(kg?d)]+丙氨酰谷酰胺注射液(Ala-Gln)[0.75mg/(kg?d)]組(C組)和ISO[5mg/(kg?d)]+纈沙坦[30mg/(kg?d)]組(D組)。各組1次
5、/d給予相關(guān)試劑,ISO連續(xù)給藥7d,而C、D兩組大鼠繼續(xù)給予相關(guān)試劑至28d后處死。心肌組織中血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)含量采用放免法檢測;通過H-E染色觀察心肌纖維化情況;Masson染色計(jì)算膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)并作為心肌纖維化程度的量化指標(biāo);免疫組化SP法半定量測定心肌組織中熱休克蛋白70(Hsp70)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶1/2/3(p-JNK1/2/3)、c-Jun及Cx43蛋白的表達(dá)。
結(jié)果:
第
6、一部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果:DMSO組大鼠心房肌組織中AngⅡ含量與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),而模型組、干預(yù)組和QUE組則均顯著高于對照組(P均<0.01)。HE、Masson染色結(jié)果示對照組和DMSO組大鼠心房纖維化不明顯,模型組和QUE組則有明顯的纖維化,而干預(yù)組纖維化程度較模型組和QUE組心房纖維化程度弱(P均<0.01)。對照組、DMSO組、模型組和QUE組心肌組織Hsp70含量比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05),而
7、干預(yù)組則顯著高于上述各組(P均<0.01)。DMSO組大鼠心房肌組織中p-JNK1/2/3和c-Jun含量與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05),模型組、QUE組均顯著高于對照組和DMSO組(P均<0.01),而干預(yù)組與對照組和DMSO組相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05),且顯著低于模型組和QUE組(P均<0.01)。DMSO組大鼠心房肌組織中Cx43含量與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)且呈線性規(guī)律分布,而模型
8、組和QUE組則顯著少于對照組(P均<0.01)且分布無規(guī)律性,側(cè)面分布相對增多,干預(yù)組則較模型組、QUE組表達(dá)增多(P均<0.01)且分布較規(guī)律。
第二部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果:AngⅡ在B、C、D組中含量較A組顯著升高且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01);B組與A、C、D組相比出現(xiàn)明顯的心房纖維化(P均<0.01)且心肌組織中p-JNK1/2/3和c-Jun的含量較高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01),C、D組與A組相比心房纖維化程度
9、及心肌組織中p-JNK1/2/3和c-Jun的含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05);與其它各組相比,C組中Hsp70的含量明顯升高,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01),A、B、D組中Hsp70的含量相互間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05);B組中Cx43含量較A組減少(P<0.01)且分布無規(guī)律性,側(cè)面化分布相對增多。而C、D組中Cx43含量與A組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)且部分呈線性分布于心肌細(xì)胞閏盤處;C、D兩組中
10、Cx43含量比較無明顯差異(P>0.05)。
結(jié)論:
1.谷氨酰胺誘導(dǎo)Hsp70高表達(dá)可減輕ISO誘發(fā)的大鼠心房肌纖維化程度和Cx43重構(gòu),機(jī)制可能與Hsp70下調(diào)p-JNK1/2/3和c-Jun表達(dá)、抑制JNK信號通路激活有關(guān)。
2.谷氨酰胺與纈沙坦均可減輕AngⅡ誘發(fā)的大鼠心房纖維化及Cx43重構(gòu),其機(jī)制可能與降低p-JNK1/2/3和c-Jun的表達(dá),抑制JNK信號通路的不同位點(diǎn)有關(guān),兩者在改善大鼠心
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