艾灸通過誘導(dǎo)熱休克蛋白70表達(dá)抑制大鼠胃黏膜細(xì)胞凋亡線粒體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的研究.pdf

1、目的：
　　 ①通過觀察艾灸預(yù)處理對(duì)健康大鼠不同組織器官HSP70 表達(dá)的影響，探討艾灸防病保健理論的分子生物學(xué)基礎(chǔ)；
　　 ②通過觀察槲皮素灌胃阻斷HSP70 合成后，艾灸預(yù)保護(hù)作用是否依然存在，進(jìn)一步明確艾灸保護(hù)作用與HSP70 表達(dá)的關(guān)系；
　　 ③通過觀察艾灸誘導(dǎo)的HSP70 對(duì)急性胃黏膜損傷大鼠胃黏膜細(xì)胞凋亡及其線粒體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中關(guān)鍵物質(zhì)細(xì)胞色素C（Cyt-c）、凋亡激活因子-1（Apaf-1）、Ca

2、spase-9 和Caspase-3 的影響，探討艾灸預(yù)處理抑制胃黏膜細(xì)胞凋亡、保護(hù)胃黏膜損傷作用的內(nèi)在機(jī)制。
　　 方法：本研究分為三個(gè)部分。第一部分實(shí)驗(yàn)：32 只wister 健康大鼠隨機(jī)分為4 組，即空白組、捆綁組、艾灸穴位組、艾灸非穴組，8 只/組。采用免疫組化方法檢測(cè)大鼠心肌、腦組織、胃黏膜HSP70 蛋白表達(dá)的變化，實(shí)時(shí)定量RT-PCR 方法檢測(cè)大鼠胃黏膜HSP70mRNA 的表達(dá)。第二部分實(shí)驗(yàn)：40 只wister

3、 健康大鼠隨機(jī)分為5 組，即捆綁組、模型組、艾灸穴位＋模型組、槲皮素＋艾灸穴位＋模型組、槲皮素＋模型組，8 只/組。采用無水乙醇灌胃方法制備急性胃黏膜損傷大鼠模型，Guth 評(píng)分法計(jì)算大鼠胃黏膜損傷指數(shù)（UI），免疫印跡（Western-blot）方法檢測(cè)大鼠胃黏膜HSP70表達(dá)的變化，原位末端標(biāo)記（TUNEL）方法檢測(cè)大鼠胃黏膜細(xì)胞凋亡。第三部分實(shí)驗(yàn)：32 只wister 健康大鼠隨機(jī)分為4 組，即捆綁組、模型組、艾灸穴位＋模型組、艾

4、灸非穴＋模型組，8 只/組。采用Western-blot 方法檢測(cè)大鼠胃黏膜Cyt-c 的表達(dá)，免疫組化方法檢測(cè)大鼠胃黏膜HSP70、細(xì)胞凋亡、Apaf-1、Caspase-9 和Caspase-3 的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 （1）艾灸足三里、梁門穴可誘導(dǎo)健康大鼠心肌、腦組織、胃黏膜HSP70蛋白表達(dá)及胃黏膜HSP70mRNA 表達(dá)上調(diào)，與空白組、捆綁組和艾灸非穴組相比，差異具有顯著性或非常顯著性意義（P<0.05

5、或P<0.01）。
　　 （2）與模型組相比，艾灸穴位＋模型組大鼠胃黏膜損傷指數(shù)（UI）和細(xì)胞凋亡均明顯減小，HSP70 表達(dá)則顯著升高，差異非常明顯（P<0.05 或P<0.01）。
　　 （3）槲皮素阻斷HSP70 合成后，槲皮素＋艾灸＋模型組大鼠胃黏膜UI 和AI 明顯高于艾灸＋模型，且HSP70 表達(dá)明顯低于艾灸＋模型組，差異具有非常顯著性意義（P<0.01）。
　　 （4）艾灸足三里、梁門穴可以下調(diào)急性

6、胃黏膜損傷大鼠胃黏膜細(xì)胞胞漿Cyt-c 和Apaf-1 含量及Caspase-9 和Caspase-3 的表達(dá)，同時(shí)上調(diào)HSP70表達(dá)，降低大鼠胃黏膜細(xì)胞凋亡指數(shù)（AI），與模型組和艾灸非穴＋模型組比較具有顯著性或非常顯著性差異（P<0.05 或P<0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 （1）艾灸預(yù)處理可誘導(dǎo)保護(hù)性蛋白HSP70 在不同組織器官表達(dá)上調(diào)可能是艾灸“防病保健”作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　 （2）艾灸預(yù)處理可以