信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白p65與放療誘導(dǎo)口腔鱗狀細胞癌細胞凋亡的關(guān)系.pdf

1、目的：
　　 口腔鱗狀細胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是最常見的類型,占該部位癌腫的80％。早期鱗癌患者無論采用手術(shù)或放療,均能獲得良好的治療效果,但對晚期患者,盡管輔以放療、化療和生物治療為主的綜合治療后,5年生存率僅為20％-40％,效果尚不能令人滿意[1,2]。因此如何提高晚期惡性腫瘤患者生存率仍是國內(nèi)外研究的熱點。
　　 目前,對于臨床晚期的口腔頜面部癌瘤患者主張采用綜

2、合序列治療,而放射治療是現(xiàn)代腫瘤治療中僅次于手術(shù)治療的一種公認的正規(guī)療法,也是綜合序列治療的重要組成部分[3]。放射線引起敏感癌細胞凋亡是重要的治癌機制之一,現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn),放療過程中可見大量具有凋亡(apoptosis)特征的細胞,在腫瘤的放射治療中,腫瘤細胞受照射后,DNA受損而發(fā)生單鏈斷裂,而且核酸內(nèi)切酶活性升高,使DNA單鏈斷裂變?yōu)殡p鏈斷裂,誘發(fā)凋亡[4]。
　　 核因子-kB(nuclear factor-kB,NF-k

3、B)是一類具有多向轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用的核蛋白因子,具有廣泛的生物學(xué)活性,激活后參與許多基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,在感染、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、細胞增生、細胞凋亡過程中發(fā)揮作用[5]。研究表明,放射線和一些細胞毒性藥物可激活NF-kB,抑制NF-kB可減少腫瘤細胞的生長并提高腫瘤細胞對抗腫瘤藥物和放射線介導(dǎo)的凋亡的敏感性[6],而電離輻射可以通過活化核轉(zhuǎn)錄因子-kB等信號因子誘導(dǎo)細胞的凋亡/存活[7]。
　　 基于此,本課題旨在探討不同劑量X-射線

4、對口腔鱗狀細胞癌細胞中信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白p65表達的影響,并初步探討信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白p65在放療誘導(dǎo)口腔鱗狀細胞癌細胞凋亡中的作用。
　　 方法
　　 實驗采用人舌鱗狀細胞癌Tca8113細胞系,細胞復(fù)蘇后在37℃,5％CO2的孵箱中培養(yǎng)。共分對照組、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy六個劑量組,待細胞長至對數(shù)生長期后,采用德國西門子PRIMUS-H醫(yī)用直線加速器按上述劑量一次性分別對細胞進行照射。照射后繼續(xù)在37℃,5％C

5、O2的孵箱中培養(yǎng),并在照射后的不同時間點(1h、3h、6h、10h、24h、48h)分別應(yīng)用免疫細胞化學(xué)和Western Blotting檢測信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白p65在Tca8113細胞漿中的表達量,并同時應(yīng)用流式細胞儀(Flow cytometry,FCM)和末端核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的生物素化的dUTP末端標(biāo)記法(TUNEL法)檢測照射后不同劑量組的不同時間點的細胞凋亡率。
　　 結(jié)果
　　 1、不同照射劑量組的細胞漿內(nèi)p65蛋

6、白的表達量與對照組相比,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；而將不同時間點組的細胞漿內(nèi)p65蛋白表達量相互比較,3h組的細胞漿內(nèi)p65蛋白表達量與其他時間點組相比差異有顯著性(P<0.05)；
　　 2、不同照射劑量組的凋亡率與對照組相比,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),而不同時間點組的凋亡率相互比較,3h組的凋亡率與其他時間點組相比有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論
　　 X-射線可以激活口腔鱗