siRNA介導(dǎo)NF-κB p65沉默聯(lián)合5-Fu誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞SGC7901凋亡.pdf

1、目的:核因子κB（nuclear factorκ B，NF-κ B）是近年來受到廣泛研究的真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，它能與多種細(xì)胞基因的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子發(fā)生特異性結(jié)合，促進(jìn)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。研究表明NF-κ B是胃癌發(fā)生發(fā)展中的關(guān)鍵因素之一。其激活亞基NF-κ B p65可反式激活很多基因，如cyclinD1，血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）、黏附分子（ICAM-1）、多藥耐藥基因（MDR）等，進(jìn)而調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖

2、、凋亡抵抗、血管形成、侵襲轉(zhuǎn)移和耐藥。因此，本實(shí)驗(yàn)選取p65作為研究靶點(diǎn)，通過RNA干擾技術(shù)抑制NF-κ B p65基因表達(dá)，同時(shí)聯(lián)用化療藥物5-氟尿嘧啶（5-Fu），觀察該基因?qū)ξ赴┘?xì)胞增殖、凋亡及5-Fu耐藥性的影響。 方法:①實(shí)驗(yàn)分為空白對照、脂質(zhì)體組、單純藥物5-Fu干預(yù)、單純siRNA干預(yù)，以及轉(zhuǎn)染聯(lián)合加藥共5組。②利用陽離子脂質(zhì)體LipofeetamineTM2000將人工合成的NF-κ B P65 siRNA轉(zhuǎn)染入

3、SGC7901胃癌細(xì)胞株中。免疫印跡法（Western blot）檢測NF-κ B P65蛋白表達(dá)水平；Annexin V-PI法檢測細(xì)胞凋亡。③四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法測定五組不同濃度（50，75、100、150、200mg/L）NF-κ B p65siRNA轉(zhuǎn)染入SGC7901后細(xì)胞的生長情況。 結(jié)果:①NF-κ B p65蛋白在空白對照組和脂質(zhì)體組中高表達(dá)，在各試驗(yàn)組中低表達(dá)。與空白對照組相比，后三組均有明顯抑制SGC7

4、901細(xì)胞NF-κ B P65表達(dá)的作用，其表達(dá)抑制率分別是41.91％、50.68％和71.28％。②各組早期凋亡率分別為1.4±0.20％、2.36±0.58％、6.68±0.34％、6.60±0.64％和21.62±1.12％。藥物5-Fu和siRNA均明顯誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，但以聯(lián)合組抑制作用最強(qiáng)；后三組早期凋亡細(xì)胞分別是空白對照組的5倍、4倍和16倍。③MTT結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染組胃癌細(xì)胞的增殖活性隨著siRNA濃度增加和作用時(shí)間延長，下