抑制Hedgehog信號轉導通路對乳腺癌細胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、Hedgehog信號轉導通路是一個經典的控制胚胎發(fā)育的信號轉導途徑，在胚胎發(fā)育和胚胎形成后細胞的生長和分化過程中都起著重要的作用。 Hedgehog 信號通路控制著細胞的生長與增殖，而腫瘤的發(fā)生正是一個細胞生長增殖失控的過程。目前大量的研究表明，Hedgehog 信號通路的異常激活與腫瘤發(fā)生有關，很多參與腫瘤細胞增殖、擴散的效應分子（如n-Myc 、EGF 、CyclinD、CyclinE、CyclinB、BMP 等）被證明是H

2、edgehog 信號通路的靶基因或下游分子，此外Hedgehog 信號通路與很多已知調控細胞分化增殖的其他信號通路（如Notch、Wnt 等）還有交叉作用。因此，研究Hedgehog信號通路對于探明腫瘤的發(fā)生和發(fā)展從而有針對性地進行治療具有重要的意義。 在哺乳動物的Hedgehog 信號通路中，多種基因已經被鑒定為原癌基因或腫瘤抑制基因，在這些基因中，Ptch1、Smo、Shh、Gli1 和Gli2 與皮膚癌特別是基底細胞癌的發(fā)

3、生有關。因為乳腺是一種源于皮膚的器官，所以乳腺癌與皮膚癌的發(fā)生可能存在一種內在聯(lián)系。對于基底細胞癌的研究已經比較深入，但是關于Hedgehog 信號通路與乳腺癌發(fā)生的關系的研究還比較少。 Cyclopamine 是Hedgehog 信號通路特異性抑制劑，因為它能夠直接作用于該通路中的SMO，從而抑制Hedgehog 信號轉導通路的活性。既往的研究表明，cyclopamine 可顯著抑制多種因該信號通路過度激活所致的腫瘤生長,并可

4、誘導細胞凋亡,用cyclopamine 抑制Hedgehog 信號通路來研究該通路在腫瘤中的作用目前已經得到國際公認。本研究就是利用cyclopamine 作用于人乳腺癌細胞系Bcap-37 和MDA-MB-231，通過觀察cyclopamine 對人乳腺癌細胞生長、增殖和凋亡的影響，來對Hedgehog 信號轉導通路與乳腺癌發(fā)生的關系進行初步探討，從而為闡明Hedgehog 信號通路在乳腺癌發(fā)病及治療中的作用奠定基礎。 本實驗

5、采用光鏡觀察、MTT 比色試驗、BrdU 摻入試驗和流式細胞儀測定的方法觀察cyclopamine 對人乳腺癌細胞生長、增殖和凋亡的影響。 研究結果發(fā)現cyclopamine對乳腺癌細胞Bcap-37和MDA-MB-231的生長和增殖具有明顯的抑制作用并能促進其凋亡： 1. 在光鏡下細胞形態(tài)發(fā)生了明顯的變化：細胞立體感消失，細胞內空泡增多，部分細胞變小變圓，細胞間隙不明顯，說明細胞的生長受到了抑制。 2. MTT

6、試驗的結果則顯示10-7～10-5mol/L的cyclopamine可以劑量依賴性地抑制乳腺癌細胞的生長，并且5×10-6mol/L的cyclopamine對乳腺癌細胞生長的抑制作用也隨時間的延長而趨于明顯。 3. BrdU摻入試驗的結果表明，加入5×10-6mol/L的cyclopamine處理組的BrdU摻入陽性細胞明顯減少，可見cyclopamine能顯著抑制Bcap-37和MDA-MB-231細胞的DNA合成。