Notch2激活HER2信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)控乳腺癌細(xì)胞SKBR3的遷徙和侵襲能力.pdf

1、背景與目的：Notch信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與調(diào)控細(xì)胞增生、分化以及凋亡，而Notch信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的異常激活則與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，并且與多條信號通路存在交互作用，有研究認(rèn)為針對Notch信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的靶向治療可沿多條途徑發(fā)揮生物學(xué)功能，從而抑制乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展。當(dāng)前在乳腺癌治療中，曲妥珠單抗治療顯著的改善了HER2過表達型乳腺癌患者的生存率，然而對曲妥珠單抗耐藥，仍然是轉(zhuǎn)移性乳腺癌面臨的一個嚴(yán)重的臨床問題，目前針對曲妥珠單抗耐藥這一

2、現(xiàn)象，有研究正在試圖同時阻滯其他信號通路如Notch通路，期望能闡述曲妥珠單抗耐藥機制。
　　基于上述背景，本研究旨在通過構(gòu)建敲減及過表達Notch2ICD的乳腺癌細(xì)胞SKBR3，觀察Notch2在HER2過表達型乳腺癌細(xì)胞SKBR3中的生物學(xué)作用，并分析Notch2與HER2信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)性。
　　材料和方法：本研究通過siRNA、shRNA干擾HER2過表達型乳腺癌細(xì)胞SKBR3，建立瞬時敲減及穩(wěn)定沉默Notch2IC

3、D的細(xì)胞，與此同時，建立瞬時及穩(wěn)定過表達Notch2I CD的SKBR3細(xì)胞，通過Western Blot驗證Notch2的抑制或過表達效果，并觀察這兩個分子之間是否存在相互調(diào)節(jié)，通過相關(guān)功能實驗，觀察在乳腺癌癌細(xì)胞SKBR3細(xì)胞中干擾或過表達Notch2ICD時對其增殖、遷移及侵襲能力的影響。
　　結(jié)果：首先，我們敲減/過表達SKBR3細(xì)胞的Notch2ICD，并發(fā)現(xiàn)當(dāng)敲減其Notch2ICD可以抑制p-HER2/p-AKT/p

4、-ERK1/2通路蛋白水平的表達,而當(dāng)過表達其Notch2ICD可以激活p-HER2/p-AKT/p-ERK1/2通路蛋白水平的表達，但是總HER2/AKT/ERK1/2則未見明顯的改變;其次，在SKBR3細(xì)胞中使用γ-分泌酶抑制劑DAPT，可以抑制Notch2ICD與p-HER2/p-AKT/p-ERK1/2通路蛋白水平的表達，并明顯抑制細(xì)胞增殖、遷移及侵襲能力；最后，我們在功能實驗中發(fā)現(xiàn)，Notch2ICD可以促進細(xì)胞的增殖、遷移及