HOXB7基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞系SKBR-3侵襲性的影響.pdf

1、目的:研究人類同源異型盒基因HOXB-7核心片段正義轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞系SKBR-3后對(duì)其侵襲性的影響。 方法:從乳腺癌細(xì)胞系MCF-7中提取HOXB-7基因核心編碼區(qū)（HOXB7-CDS）片段，構(gòu)建含HOXB7-CDS片段的質(zhì)粒（PIRES2-EGFP-HOXB7）。采用半定量RT-PCR，Western blot印跡方法分別檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞株SKBR-3的HOXB-7基因及成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）mRNA與蛋白質(zhì)表達(dá)水平。將

2、SKBR-3細(xì)胞分為3組：空白組、陰性對(duì)照組（轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒PIRES2-EGFP）、HOXB-7正義轉(zhuǎn)染組（轉(zhuǎn)染構(gòu)建質(zhì)粒PIRES2-HOXB7）。熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率、RT-PCR、Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后HOXB-7和bFGF mRNA及蛋白表達(dá)。Transwell小室檢測(cè)3組細(xì)胞侵襲、運(yùn)動(dòng)能力的變化；明膠酶譜實(shí)驗(yàn)檢測(cè)3組細(xì)胞上清及蛋白中中兩種基質(zhì)金屬蛋白酶活性；Western blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP

3、-2）變化。 結(jié)果: RT-PCR、Western blot結(jié)果顯示：HOXB7基因及bFGF因子在乳腺癌MCF-7細(xì)胞中陽(yáng)性表達(dá)，在乳腺癌SKBR-3細(xì)胞中無(wú)表達(dá)，轉(zhuǎn)染質(zhì)粒PIRES2-HOXB7到SKBR-3細(xì)胞后，該細(xì)胞表達(dá)HOXB-7基因；小室實(shí)驗(yàn)和趨向運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)顯示轉(zhuǎn)染后細(xì)胞其侵襲力及趨向運(yùn)動(dòng)能力均上升；RT-PCR、明膠酶譜、Western blot結(jié)果顯示HOXB7正義轉(zhuǎn)染后，SKBR-3細(xì)胞MMP-2表達(dá)無(wú)明顯變化