靶向EGFR基因miR-7對(duì)胃癌細(xì)胞系侵襲轉(zhuǎn)移的影響.pdf

1、目的：探討靶向EGFR基因miR-7對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響及其作用機(jī)制。
　　方法：miRNA微陣列芯片分析胃癌細(xì)胞MGC-803（低分化）、MKN-45（低分化）、SGC-7901（中分化）及NCI-N87（高分化）與正常胃黏膜細(xì)胞GES-1中miRNA的表達(dá)差異。實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證芯片結(jié)果。生物信息學(xué)軟件對(duì)相關(guān)miRNA進(jìn)行分析，篩選出miR-7為目的miRNA。將miR-7和miR-NC質(zhì)粒載體分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至MGC-803

2、細(xì)胞，倒置熒光顯微鏡和實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率。CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活性， Trans-well小室法和劃痕試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲遷移能力。實(shí)時(shí)定量PCR、Western blot分別檢測(cè)靶基因mRNA和蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：miRNA微陣列芯片檢測(cè)結(jié)果顯示不同分化程度胃癌細(xì)胞較正常胃粘膜細(xì)胞均上調(diào)1.5倍的miRNA有miR-21、miR-26b、miR-30b等14種，均下調(diào)1.5倍的miRNA（比值<0.667）有Let-7

3、i、miR-7、miR-622等19種。利用生物信息學(xué)篩選出miR-7作為研究對(duì)象；實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證表明，MGC-803、MKN-45比GES-1 miR-7表達(dá)下調(diào)兩倍以上。倒置熒光顯微鏡和實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染miR-7的MGC-803細(xì)胞中miR-7表達(dá)水平顯著升高。CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示，miR-7轉(zhuǎn)染組明顯抑制細(xì)胞增殖；Trans-well小室法和劃痕試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示，miR-7轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞侵襲力和遷移力較轉(zhuǎn)染陰性