Ming氏膨脹型胃癌細(xì)胞系的建立.pdf

1、目的: 建立Ming氏膨脹型胃癌細(xì)胞系，探討其生物學(xué)特性，為利用Ming氏分型研究胃癌的發(fā)生機(jī)理提供一個實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?br>　　 方法: 通過混合酶消化法進(jìn)行胃癌原代培養(yǎng)進(jìn)而建立細(xì)胞系。通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色、細(xì)胞倍增時間測定、核型分析、瓊脂糖集落形成實(shí)驗(yàn)、平板克隆實(shí)驗(yàn)、免疫缺陷小鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)揭示其生物學(xué)特性。
　　 結(jié)果: 原代培養(yǎng)經(jīng)純化傳代成功建立一個Ming氏膨脹型胃癌細(xì)胞系。顯微鏡下細(xì)胞呈上皮樣，單層

2、貼壁生長，有重疊生長現(xiàn)象。除處于有絲分裂階段和衰老退變的細(xì)胞外，以梭形細(xì)胞、多邊形細(xì)胞為主。細(xì)胞HE染色見胞漿輕度嗜堿，核大、明顯，核仁清晰可見，核漿比例增大，可見多核巨細(xì)胞。細(xì)胞倍增時間(PDT)為60 h。軟瓊脂細(xì)胞集落形成率約為45.8％;平板克隆形成率約等于8.13％。細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色顯示:細(xì)胞Ⅳ型膠原表達(dá)陽性，胞漿內(nèi)均勻染色;角蛋白染色呈強(qiáng)弱不同的陽性表達(dá)，胞漿均勻淡染;質(zhì)子泵染色顯示大部分胞漿及胞膜彌漫深染，呈強(qiáng)陽性表達(dá)

3、;胞漿層粘連蛋白均勻深染，呈強(qiáng)陽性表達(dá);Ki-67染色顯示細(xì)胞核呈褐色，胞漿及胞膜未著色，200倍鏡下隨機(jī)取5個視野計數(shù)平均染色率約為80.6％; CEA染色顯示胞漿內(nèi)彌漫著色，染色較深，呈強(qiáng)陽性表達(dá);波形蛋白染色見胞漿均勻著色，提示表達(dá)陽性;E-鈣蛋白染色胞漿內(nèi)染色較淡，呈弱陽性表達(dá)。細(xì)胞染色體眾數(shù)介于23～137條之間。三倍體及亞三倍體細(xì)胞(46＜染色體數(shù)≤69)占86％，為穩(wěn)定的亞三倍體細(xì)胞系。裸鼠異體接種全部成瘤。