HGPRT缺陷型細(xì)胞系建立及其與人淋巴細(xì)胞的融合.pdf

1、本研究用化學(xué)誘變劑N-甲基-N’-硝基—N-亞硝基胍(MNNG)誘變建立次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)缺陷型的HepG2細(xì)胞與Hela細(xì)胞系,并將其與人扁桃體淋巴細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合,得到兩種HGPRT缺陷型細(xì)胞和雜交細(xì)胞。
　　 對手術(shù)切除的扁桃體進(jìn)行淋巴細(xì)胞分離,得到混合淋巴細(xì)胞,尼龍棉柱分離T、B淋巴細(xì)胞,并分別用E-花環(huán)法與ELISA法鑒定細(xì)胞。E-花環(huán)形成百分比為59.4％,ELISA鑒定出細(xì)胞表面CD23抗原

2、濃度在30 pg／ml-60 pg／ml之間。由扁桃體分離得到的混合淋巴細(xì)胞顯微鏡下觀察,細(xì)胞呈規(guī)則的圓型,且透亮,體外培養(yǎng)4-5天出現(xiàn)聚集生長現(xiàn)象。尼龍棉柱分離的T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞在外形上沒有明顯的差別。B淋巴細(xì)胞于體外培養(yǎng)第7天進(jìn)入衰亡期,后便迅速死亡,第9天時(shí)全部死亡。T淋巴細(xì)胞可在體外連續(xù)培養(yǎng)20天,但隨后也進(jìn)入衰亡期,逐漸死亡。
　　 通過N-甲基-N’-硝基-N-亞硝基胍(MNNG)誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞與Hela細(xì)

3、胞,逐步提高培養(yǎng)液中6-巰基鳥嘌呤(6-TG)的濃度,篩選出對6-TG有抗性的細(xì)胞株,檢測它在HAT中生長的情況,得到可在含20μg／ml6-TG的高糖DMEM完全培養(yǎng)基中穩(wěn)定生長的細(xì)胞株,此細(xì)胞株在HAT培養(yǎng)基中第三天出現(xiàn)明顯的死亡,第12天全部死亡,誘變后細(xì)胞的染色體分別分布于32-88、36-86,染色體眾數(shù)分別為48、68。突變篩選出的細(xì)胞具有對6-TG抗性和對HAT敏感的特性,證實(shí)該細(xì)胞是HGPRT缺陷型細(xì)胞株,為以后進(jìn)行雜交