小鼠iPS細(xì)胞系的建立及向生殖細(xì)胞的誘導(dǎo)分化.pdf

1、iPS細(xì)胞(induced pluripotent stem cell，iPSC)具有分化成機(jī)體所有類型組織細(xì)胞的潛能，且克服了ES細(xì)胞不可避免的倫理問(wèn)題和臨床移植中的免疫排斥問(wèn)題。其建系和定向分化研究已成為當(dāng)今研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域。生殖細(xì)胞在個(gè)體發(fā)育中占有重要地位，iPS細(xì)胞體外分化獲得的生殖細(xì)胞，不僅可作為基因修飾的源頭細(xì)胞，通過(guò)受精即可獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，且對(duì)不孕不育的治療提供了很好的解決方案。
　　本研究采用pMXs-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體

2、介導(dǎo)Yamanaka OSKM四因子轉(zhuǎn)錄，結(jié)合Dox控制的Tet-on誘導(dǎo)系統(tǒng)，成功建立了小鼠iPS系，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行分析鑒定，在AP活性，染色體數(shù)目，干細(xì)胞標(biāo)記，體內(nèi)畸胎瘤組織切片和體外分化免疫熒光的鑒定試驗(yàn)中，證實(shí)該iPS細(xì)胞系具有和ES細(xì)胞相似的特性。將獲得的小鼠iPS細(xì)胞以3×104個(gè)/mL濃度懸滴培養(yǎng)制作EB，分化形成的細(xì)胞，可觀察到持續(xù)的跳動(dòng)現(xiàn)象，經(jīng)免疫熒光鑒定，其表達(dá)心肌特異性蛋白GATA4。添加一定濃度RA的誘導(dǎo)液