小鼠原始生殖細(xì)胞的分離和培養(yǎng).pdf

1、本研究以昆明白小鼠為材料，從624例小鼠胎兒中分離培養(yǎng)原始生殖細(xì)胞(PrimordialGermCells)并進(jìn)行傳代克隆和鑒定研究，探討了影響胚胎生殖細(xì)胞(EG細(xì)胞)分離與培養(yǎng)的因素，為建立昆明白小鼠EG細(xì)胞系奠定了基礎(chǔ)，試驗(yàn)結(jié)果如下： 1.試驗(yàn)從7.5dpc～14.5dpc的昆明白小鼠胎兒分離培養(yǎng)原始生殖細(xì)胞，7.5dpc～9.5dpc取胎兒后1/3部分，包括原條后端和尿囊，10.5dpc～11.5dpc取泌尿生殖嵴，包括中

2、腎和生殖嵴原基，12.5dpc～14.5dpc取生殖嵴，并克隆傳代，最高傳至第8代； 2.試驗(yàn)用分次消化法處理胎兒，對(duì)比不同的消化液對(duì)PGCs分離克隆的影響。0.125％胰蛋白酶+0.02％EDTA、0.05％胰蛋白酶+0.008％EDTA和0.25％胰蛋白酶+0.04％EDTA，三組消化差異不顯著(P＞0.05)，都可以用于消化分離小鼠胎兒生殖嵴及復(fù)合物來獲得PGCs； 3.試驗(yàn)比較了不同的培養(yǎng)系統(tǒng)：飼養(yǎng)層添加白血病抑

3、制因子(LIF)，飼養(yǎng)層不添加細(xì)胞因子，飼養(yǎng)層添加大鼠心肌細(xì)胞條件培養(yǎng)基，結(jié)果是SD大鼠心肌條件培養(yǎng)基能夠較好地用于分離培養(yǎng)昆明白小鼠PGCs，與添加LIF組差異不顯著(P＞0.05)，但明顯好于未添加細(xì)胞因子組，可以用于昆明白小鼠PGCs的分離培養(yǎng)； 4.試驗(yàn)比較了不同傳代方法對(duì)小鼠胚胎生殖細(xì)胞(EG細(xì)胞)傳代的影響，發(fā)現(xiàn)“手工傳代”和“連同成纖維細(xì)胞一起消化”相比獲得了較高的傳代比率(P＜0.05)，手工傳代“消化+連續(xù)離散