人臍帶華爾通氏膠源間充質(zhì)干細(xì)胞向男性生殖細(xì)胞誘導(dǎo)分化的研究.pdf

1、【背景與目的】生殖細(xì)胞缺陷所致的男性不育癥是目前臨床難于攻克的疾病，傳統(tǒng)輔助生殖技術(shù)尚無法從根本上解決此類病人的生育問題，精原干細(xì)胞移植是突破這一瓶頸的理想途徑。人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具有多向分化潛能，一定條件下可向三個(gè)胚層組織細(xì)胞分化，前期的研究表明，人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在體外誘導(dǎo)后表達(dá)部分生殖細(xì)胞標(biāo)記，移植到不育小鼠體內(nèi)不發(fā)生排斥反應(yīng)，且可發(fā)生遷移并能存活至少120天。本研究將在前期研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)外向精原

2、細(xì)胞的分化潛能及其生物學(xué)特性。
　　 【材料與方法】采用差異貼壁法分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增出人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記表達(dá)情況；利用新生小鼠睪丸細(xì)胞培養(yǎng)液、維甲酸、睪酮作為條件誘導(dǎo)液，將人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在條件誘導(dǎo)液中培養(yǎng)，顯微鏡觀察誘導(dǎo)前后細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；
　　 RT-PCR、細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)男性生殖細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記的表達(dá)；將人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植于不育小鼠睪丸內(nèi)，RT-PCR檢測(cè)體內(nèi)移植細(xì)胞的生殖細(xì)胞相關(guān)

3、標(biāo)記的表達(dá)。
　　 【結(jié)果】人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具有多能干細(xì)胞的生物學(xué)特性，高表達(dá)多能干細(xì)胞標(biāo)記CD44、CD29、CD59、OCT4；人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在生殖細(xì)胞條件誘導(dǎo)液中誘導(dǎo)培養(yǎng)，誘導(dǎo)第7天形態(tài)上開始變細(xì)變長，形成類似“蝌蚪樣”細(xì)胞，第3、7天表達(dá)生殖細(xì)胞標(biāo)記Oct4、Ckit、CD49f、Stella，第14天表達(dá)生殖細(xì)胞特異標(biāo)記Vasa；人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植至不育小鼠睪丸體內(nèi)，1個(gè)月后表達(dá)生殖細(xì)胞標(biāo)記Stella、Da